İzole damar fizyolojik yanıtlarını ölçebilmek için kuyucuklu ölçüm tekniğinin geliştirilmesi ve klasik organ banyosuyla karşılaştırılması

Abstract

Amaç: Bu projenin amacı, çoklu kuyucuklu organ banyosu (MuWOB) modelinin modifiye ederek geliştirmek ve bu yöntemi klasik organ banyosu sonuçları ile karşılaştırmaktır.Yöntem: 96'lık plate'ler, plate'in altından teleobjektif takılmış monokron 10Mp çözünürlükte kamera ile görüntülenmektedir. Kameranın plate'e uzaklığı aynalar kullanılarak daha küçük bir alana indirgenmiştir. Alınan görüntüden yazılım aracılığıyla damarların pikselleri sayılıp, bu veri damarın fizyolojik yanıtlarını belirlemede kullanılmıştır. Damar fizyolojik yanıtları olarak kasılma yanıtları (fenilefrinle 10-11-10-6 M kümülatif ve 68 mM KCI ile) ve gevşeme yanıtları (asetilkolin 10-11-10-6 M kümülatif ve SNP (sodyum nitroprussid) 10-11-10-6 M kümülatif) ölçülmüştür.Bulgular: Modifiye ettiğimiz MuWOB sisteminde, distorsiyonun ortadan kalktığı, neredeyse tüm kuyucuklardan görüntü alınabildiği ortaya çıkmıştır. Kameradan elde edilen görüntüler karşılaştırıldığında, modifiye MuWOB ile plate'in neredeyse tümünde net bir bi.imde görüntü elde edilebilmiştir. Endotelin ne derece korunduğuna ilişkin karşılaştırmada ise, modifiye MuWOB sisteminde endotel yanıtlarının klasik organ banyosu sonuçlarına göre daha iyi korunduğu görülmüştür. Aynı zamanda kuyucuklarda, gazlanmış ve gazlanmamış Krebs solüsyonu kullanımı açısından anlamlı bir fark bulunamamıştır. Modifiye MuWOB sisteminde alttan görüntünleme sağlanarak kırılma indisinin etkisi ortadan kaldırılmıştırSonuç: Organ banyosuna alternatif olmaya aday MuWOB sisteminin, klasik organ banyosuna göre avantajları bulunmaktadır. Bizim geliştirdiğimiz modifiye MuWOB sistemi de MuWOB'un pratikte kullanılabilirliğini artırılmasına ve ticarileştirilmesine katkıda bulunabilir.

Objective: The aim of this project is to modify and improve the multi-well organ bath (MuWOB) model and compare this method with the results of classical organ bath.Method: 96-well plates are displayed with a lens fitted monochron 10 Mp resolution camera attached to the bottom of the plate. The distance of the camera to the plate is reduced to a smaller area using mirrors. The pixels of the vessels were counted from the downloaded image. This data was used to determine the physiological responses of the vessel. Contraction responses (phenylephrine 10-11-10-6 M cumulative and 68 mM KCl) and relaxation responses (acetylcholine 10-11-10-6 M cumulative and SNP (sodium nitroprusside) 10-11-10-6 M cumulative) were measured as physiological responses of the vessel.Results: In the modified MuWOB system, distortion disappeared and images were obtained from almost all wells. Comparing the images obtained from the camera, the modified MuWOB was able to produce a clear image in almost all of the plate. In the comparison of the degree of protection of endothelium, it was observed that endothelial responses were better preserved in the modified MuWOB system compared to classical organ bath results. Also, there was no significant difference in the use of gassed and non-gassed Krebs solution in the wells. In the modified MuWOB system, the effect of the refractive index was eliminated by providing visualization from the bottom.Conclusion: The MuWOB system, which is an alternative to an organ bath, has advantages over a conventional organ bath. The modified MuWOB system that we developed can also contribute to the practical use and commercialization of MuWOB.