Çiğ sütlerden izole edilen bacillus türlerinin proteinaz, beta lattamaz enzim aktivitelerinin araştırılması ve değişik tuz konsantrasyonlarında bacillus türlerinin staphylococcus aereus türü üzerine inhibitör etkilerinin

Abstract

Araştırmamızda, 195 çiğ süt örneğinden 33 Bacillus izole edilerek adlandırılmıştır. Araştırmamızda, çiğ süt örneklerinden izole edilen Bacillus türleri içinde en yaygın olarak görülen tüller, 3 B.brevis (%9), 3 B.cereus (%9), 3 B.licheniformis (%9), 3 B.mycoides (%9), 3B.sphaericus (%9), 3 B.stearothermophilus (%9) ve 3 B.subtilis (%9) tülleri olup, B.megaterium (%3) türünün izolasyonu ise düşük oranlarda gerçekleştirilmiştir. İzole edilen Bacillus'larm. proteinaz enzim aktiviteleri Skim-Milk Agar ve YCB-BSA (Yeast Carbon Base-Bovine Serum Albumin) Agar besiyerleri kullanılarak değerlendirilmiştir. 33 Bacillus'un sadece 6'smda proteolitik aktivite pozitif olarak bulunmuştur. Geriye kalan 27 Bacillus'da ise hiçbir proteolitik aktivitegözlenmemiştir. Proteolitik aktivitesi pozitif olarak bulunan 6 Bacillus izolatı 5 Bacillus türü olarak tespit edilmiştir. Bunlar sırasıyla; BAentus (B.lentus-I, B.lentus-II), B.subtilis, B.cereus, B.sphaericus ve B.megaterium türleridir. İzolatlann büyük bir çoğunluğu her iki besiyerinde de kuvvetli proteolitik aktivite göstermiştir. Ancak Skim-Milk Ağarda, YCB-BSA Ağara oranla proteolitik aktivite zonlan daha iyi gözlenmiştir. Çalışmamızda adlandırılmaları yapılan Bacillus'larm proteolitik enzim aktiviteleri yanında beta-laktamaz enzim aktiviteleri de çalışılmıştır. Bu amaçla çalışmamızda, Iodometrik Test ve Kromojenik Sefalosporin (Nitrosefin) Test yöntemleri kullanılarak beta-laktamaz enzim aktiviteleri de çalışılarak değerlendirilmiştir. 33 Bacillus,/m 10'unda beta-laktamaz enzim aktivitesi pozitif olarak tespit edilmiştir. Beta-laktamaz pozitif olan 10 Bacillus türünün 2'si B.lentus, l'i B.megaterium, 2'si B.brevis, 2'si B. mycoides ve 3'ü B.polymxa'du. Geriye kalan 23 Bacillus izolatının beta-laktamaz enzim varlığı negatif olarak değerlendirilmiştir. Araştırmamızda ayrıca, beta-laktamaz enzim aktivitesi ve proteinaz enzim aktivitesi pozitif olarak değerlendirilen üç Bacillus türümüz tespit edilmiştir. Bacillus lentus-I, Bacillus lentus-II ve Bacillus megaterium türlerinin hem proteinaz ve hem de beta-laktamaz enzim aktiviteleri pozitif olarak değerlendirilmiştir. Beta-laktamaz enzim varlığı pozitif ve negatif olarak tespit edilen Bacillus'lamı azitromisin, klaritromisin, imipenem, ampisillin, sefazolin, sefalotin, seftriakson ve amikasin antibiyotiklerine karşı duyarlılıkları test edilmiştir. Beta-laktamaz pozitif ve negatif Bacillus türlerinin azitromisin, klaritromisin ve imipenem antibiyotiklerine karşı hassasiyetleri tespit edilmiştir. Ampisillin antibiyotiğine karşı ise beta- laktamaz pozitif Bacillus türleri dirençli bulunurken, beta-laktamaz negatif Bacillus türleri duyarlı olarak tespit edilmiştir. Araştırmamızda adlandırılmaları yapılan Bacillus türlerinin proteinaz enzim aktiviteleri ve beta-laktamaz enzim aktiviteleri yanında aynı ortamda kontaminant olarakbulunan Staphylococcus aureus türü üzerine inhibitor etkileri de çalışılmıştır. Bu amaçla BHI agar besiyerine %4, %4.5, %5, %5.5, %6 ve %6.5 konsantrasyonlarmda NaCl ilave edilerek inhibitor etkileri kuyu difüzyon yöntemi ile değerlendirilmiştir. Çalışma sonucunda Bacillus türlerinden sadece Bacillus lentus-I ve Bacillus lentus-H izolatlarının Staphylococcus aureus türü üzerine inhibitor etkisi gözlenmiştir. Geriye kalan Bacillus türlerinin Staphylococcus aureus türü üzerine hiçbir inhibitor etkisi gözlenmemiştir. Bacillus lentus-I ve Bacillus lentus-II izolatlarının Staphylococcus aureus türü üzerine %4, %4.5, %5 ve %5.5 NaCl konsantrasyonlarmda inhibitor etMlerinin olduğu gözlenmiştir. Bu inhibitor etki sonucunda oluşan inhibisyon zon çaplarında giderek artış gösterdikleri tespit edilmiştir. Ancak %6 ve %6.5 NaCl konsantrasyonlarında ise hiçbir inhibitör etki gözlenmemiştir.

In this research, 33 Bacillus strains were isolated and named from 195 raw milk samples. The most widespread species were found to belong to 3 B.brevis (%9), 3 B.cereus (%9), 3 BMcheniformis (%9), 3 B.mycoides (%9), 3 B.sphaericus (%9), 3 B.stear other -mophilus (%9) and 3 B.subtilis (%9). The other species, B.megaterium (%3) was determined to be too low number of species. The proteinase enzyme activities of Bacillus species isolated were evaluated by using the mediums of Skim-Milk Agar and YCB-BSA (Yeast Carbon Base- Bovine Serum Albumin) Agar. Only 6 isolates from 33 Bacillus strains were found possitive proteolytic activities. The rest of 27 Bacillus strains were not observed proteolytic activities. 6 Bacillus isolates foundpossitive proteolytic activities were determined 5 Bacillus species. These species were BJentus (B.lentus-I and B.lentus-II), B.subtilis, B.cereus, B.sphaericus and B.megaterium. A large amount of isolates showed the strongest proteolytic activity on both medium. However, proteolytic activity zones exhibited on Skim-Milk Agar were better than YCB-BSA (Yeast Carbon Base- Bovine Serum Albumin) Agar. In the paper, the activity of proteolytic enzyme of Bacillus strains were named and also their beta-lactamase enzyme activities were studied. By the aim of this study, the activity of beta-lactamase enzyme of Bacillus strains named in this study were studied by Iodometric Test and Chromogenic Cephalosporin (Nitrocefin) Test methods. The 10 samples of 33 Bacillus strains were determined possitive activity of beta- lactamase enzyme. The two strains of the 10 Bacillus strains of beta-lactamase possitive were BJentus, one strain was B.megaterium, two strains were B.brevis, two strains were B.mycoides and three strains were B.polymxa. The rest of 23 Bacillus strains were determined negative activity of beta-lactamase enzyme. Besides in this research, three Bacillus species were determined that their beta-lactamase enzyme activities and proteinase enzyme activities were possitive. Either proteinase or beta-lactamase enzyme activities of Bacillus lentus-I, Bacillus lentus-II and Bacillus megaterium species were determined as a possitive. Bacillus strains determined as possitive and negative of beta- lactamase enzyme were tested sensitive effects against azitromycen, claritromycen, imipenem, cephalothin, cephazolin, ceftriaxone, ampicillin and amicasin antibiotics. Azitromycen, claritromycen and imipenem antibiotics were determined to be sensitive for all of beta-lactamase possitive and nagative Bacillus strains. Ampicillin antibiotic was determined to be resistant for all of beta-lactamase possitive Bacillus strains but ampisilin antibiotic was determined to be sensitive for all of beta-lactamase negative Bacillus strains. The inhibitory effect of Bacillus strains against Staphylococcus aureus whichwas found to be contaminant in same medium of Bacillus strains was studied in our research. By the aim of this, the inhibitory activity was evaluated by well diffusion method in BHI Agar supplemented with 4%, 4.5%, 5%, 5.5%, 6%, and 6.5%, concentrations of NaCl. Finally, only Bacillus lentus-I and Bacillus lentus-II of Bacillus isolates were observed to make inhibitory effect against Staphylococcus aureus species. The rest of Bacillus species were not observed to make inhibitory effect against Staphylococcus aureus. Bacillus lentus-I and Bacillus lentus-II were observed to make inhibitory effect against Staphylococcus aureus 4%, 4.5%, 5% and 5.5% salt concentrations, respectively. The inhibition zone diameters of Bacillus inhibitory effects were showed to increase, gradually. But in 6% and 6.5% salt concentrations were not exhibited inhibitory effect against Staphylococcus aureus. Science Code : 4010104 Key Words : Bacillus, Proteinase, Beta-Lactamase, Inhibitory Effect, NaCl, Raw Milk. Page number : 172 Adviser : Doç. Dr. Güven URAZ