Klinik örneklerinden izole edilen bacteroides türlerinde B-laktamaz varlığı, antibiyotik duyarlılığı ve plazmid içeriğinin araştırılması

Abstract

İnsan enfeksiyonlarının büyük bir kısmından sorumlu olan anaerob bakterilerin, tanımlanmalarının zaman alıcı ve pahalı olması, ayrıca klinik önemleri ile ilgili belirsizlikleri, enfeksiyonların tanısında, bu bakterilerin genellikle ihmal edilmesine neden olmuştur. Ancak günümüzde anaerob bakteri enfeksiyonlarının gittikçe önem kazanması ve bu bakterilerin antimikrobiyal ajanlara kısa sürede direnç geliştirmesi, bu organizmaların kesin identifikasyonunu gerekli hale getirmiştir. Bacteroides'ler, anaerob enfeksiyonlardan sıklıkla izole edilmeleri ve yaygın olarak kulanılan geniş spektrumlu antimikrobiyal ajanlara, diğer anaerob'lardan daha fazla direnç göstermeleri nedeniyle önemli anaerob patojenler olarak kabul edilmektedirler. Yukarıda anılan sebeplerden dolayı, bu çalışmanın başlıca amacı Bacteroides' leri klinik örneklerden izole etmek herbir izolatın ß-laktamaz varlığı, antibiyotik duyarlılığı ile plazmid içeriğini saptamak olmuştur. Araştırmamızda anaerob enfeksiyon düşünülerek alınan 147 farklı klinik örnekten 32 Bacteroides ve beraberinde 15 diğer anaerob bakteriler olmak üzere toplam 47 (%31.9) anaerob bakteri izole edilmiştir.izolasyon amacıyla, anaerob bakterilerin üremesini kolaylaştırıcı selektif BBE, KVLB, PEA agar ile non-selektif brucella kanlı agar ve CDC anaerob kanlı agar besiyerleri kullanılmıştır, inkubasyon amacıyla anaerob jar sistemi seçilmiştir. İzole edilen bakterilerin identifikasyonları API 20 A ve Rapid ID 32 A sistemleri ile kombine olarak gerçekleştirilmiştir. İzole ve identifiye edilen, herbir Bacteroides türünün ß-laktamaz aktivitesi kromojenik sefalosporin (nitrosefin) test ile belirlenmiş ve izolatların %65'i ß - laktamaz pozitif olarak saptanmıştır, p-laktamaz pozitif ve negatif tüm izolatların 13 antimikrobiyal ajana (penisilin-G, amoksisilin, amoksisilin+klavulanik asit, sefoksitin, imipenem, klindamisin, metronidazol, piperasilin.tikarsilin, rifampisin, kloramfenikol, tetrasiklin ve eritromisin,) karşı duyarlılıkları, anaerob bakterilerin duyarlılık testleri için geliştirilmiş bir API sistemi olan ATB ANA sistemi ile gerçekleştirilmiştir. Bütün ajanlar, p-laktamaz negatif türlere karşı mükemmel aktivite gösterirken, p-laktamaz pozitif türlerde genelde bu ajanlara karşı direnç gelişimi tespit edilmiştir. Araştırmamızda, 23 Bacteroides izolatının miniprep yöntemi ile plazmid analizleri çalışılmıştır. 23 fîactero/cfes'in 13'ünde molekül ağırlıkları 1, 2 kb, 1, 5 kb ve 1, 7 kb olan plazmid'ler tespit edilmiştir. Ayrıca plazmid ile p- laktamaz varlığı ve antibiyotik direnci arasında ilişki araştırılmış ve plazmid varlığı ile bu özellikler arasında korelasyon olmadığı tespit edilmiştir.

Since it is expensive and time consuming to identify the anaerobic bacteria, which are the reasons for many human infections, and also because they have a clinical significance and are imprecise, these bacteria have been generally neglected during the identification of the infections. However, the fact that the anaerobic bacteria gain more importance today and these bacteria develop a resistance to antimicrobial agents in a very short time, has rewuired the precise identification of these organismis. Bacteroides are considered important anaerobic pathogens, as they are often isolated from anaerobic infections quite frequently and have more resistance to the antimicrobial agents with large spectrums than other anaerobes do. Further to the above-mentioned reasons, the main objection of this research is to isolate Bacteroides from clinical samples and to determine the ?- Lactamase existence, antibiotic susceptibility and plasmid contents of each isolate. During this research, totally 47 (%31.9) anaerobic bacteria were isolated, 32 of which were taken from 147 different clinical samples considering the anaerobic infections while 15 of which were different anaerobic bacteria.For isolation purposes, mediums such as BBE, KVLB, PEA agar, non selective brucella, blood agar and CDC anaerobe blood agar, which are making the reproduction of the anaerobic bacteria easier, have been used. For incubation purposes, anaerobe jar system was chosen. The identification of the isolated bacteria was carried out by the combination of API 20 A and Rapid ID 32 A systems. ?-Lactamase activities of each isolated and identified Bacteroides strain, have been determined by choromogenic cephalosporin (nitrocefin) test and 65 % of the isolates were determined to be p-lactamase-positive. The susceptibility of all ?-lactamase-positive and negative isolates to 13 antimicrobial agents (penicillin-G, amoxicillin, amoxicillin/clavulanic acid, cefoxitin, imipenem, clindamycin, metronidazole, piperacillin, ticarcillin, rifampicin, chloramphenicol, tetracycline and erythromycin) were tested by the ATB ANA system which is an API system that is developed for the susceptibility testing of the anaerobic bacteria. All agents showed excellent activity against p-lactamase-negative strains while, in general, development against these agents was observed in the p- lactamase positive strains. In our research, plasmid analyses of 23 Bacteroides isolates have been studied with miniprep method, plasmids with molecular weights of 1.2 kb, 1.5 kb and 1.7 kb were identified in 13 Bacteroides out of 23. In addition to this the relation between ?-lactamase existence and antibiotic resistance was investigated and no correlation between these features has been found.