Saccharomyces cerevisiae yağ asidi sentetaz geni, a-alt ünitesi, e fragmanının moleküler alt klonlanması ve nukleotid dizisinin saptanması

Abstract

VI. ÖZET Saccharoayces cerevisiae yag asidi seatetaz geni, a-alt ünitesi- E fragmanının molekül er ait kloniantaası ve nukleotid dizisinin saptanıaası : Bu çalışmada aaya yağ asidi senteta.z 2 (a-alt ünitesi) nin birf ragaaaı çl,aa E fragmanının ait kloniantaası ve DNA'sınm dizilenmesi üzerinde çal.ı şılısı ş t ir. a-alt ünitesi E fragmanının internal bir, kod'içerip icsrmedigi veya herhangi bir aktif yere sahip olup olmadığı araştırıldı. 2 fragîsan.ı PBR322 plasıaidi ile bağlandı,, ve sonra E» Coli JM109 kon'ak hücresi içersine transferase edilerek üretildi. Daha sonra plasmid DNA alt klonlardan izole edil di» Ve sesiuts klorür al tr asantr if ügasyonu ile saf laşt ir ıl.dı. Elde edil en. kapal ı ynvariak ;.DNAr Maxax-Gilb er t metoduna gö re dizilendi'. ECOR ve Hind III yerlerinde işaret İeıae3«?le elde edilen bu fragmanın dizisi «-ait ünitesinin protein dizisini daha kolay belirlemeye olanak tanıdı. E -fragma nının yaklaşık 850 nukleotid içerdiği ve 283 atninoasidi-4 9- ködlayabiieceği bulundu. Tesbit edilen aminoasid dizisi j, asinoasid dizisi bilinen yağ a'sidi sentetaz kompleksi en zimleri ile karşılaştırıldığında herhangi. bir - benzerlik saptanataad ı. Bu bulgu yağ asidi sentetaz sistemindeki bilinen akti'f bir proteini kodlamad ığını düşündürür.

VII, SUMMARY Molecular subcloning and DNA sequencing of fragment E of a-subunit of fatty acid synthetase gene in Sacchoraa- y c e s cer ev i s i a e ; The project described here involved the subcloning and sequencing of a fragment of yeast fatty acid synthetase 2 kaowa as fragment E. It was neccessary to determine the internal. code of this fragment and to locate its active si.te(s), Fragment E was iigated with plasmid FBR322 and then transformed into' E.Coli JK1Q-9 host cells. Fiasmid DNA was isolated from subclones, and then D'KA -was purified by cesium chlorid ul tracen.tr if uga t ion. Closed circular plasmid DNA was sequenced according to M ax am and Gilbert procedure. The sequence of this fragnent was obtained through labelling at the ECOR, site and Hind III site. Thus base sequencing i sequence of a-subur.it of fattyacid.synthetase, fragnent-Ji- E contains approximately 850 nucleotides. Since the size o'f the fragment is approximately 850 'base pair, it could code for 283 acinoacids. This might show that there was no active site on fragment E coding for anyone of the known -enzymes of the fatty acid synthetase system. When this amino acid sequence was compared to the amino acid sequence of the enzymes of. the fatty acid synthetase system, no homology was detected.