İnsan periferik lenfositlerinde amino asit ve glukoz transportunun hız ve kinetiğinin incelenmesi

Abstract

- 46 - VL ÖZET Hücrelerin canlı kalmasında ve temel fonksiyonlarını yürütebilmelerinde en önemli besin maddeleri glukoz ve amino asitlerdir. Bu moleküllerin transport hızı bir çok hücre içi mekanizmada hız kısıtlayıı kademeyi teşkil etmektedir. Bu ne denle, transport mekanizmalarının incelenmesi normal ve pa tolojik durumlarda hücreyle ilgili önemli bilgiler verir. Çalışmamızda, insan periferik lenfositlerinde glukoz ve amino asit transport hızını inceleyecek pratik bir yöntem kurmayı amaçladık. Glukoz transport çalışmalarında bir glukoz analoğu olan 2-deoksiglukoz (2D0G), amino asit transport ça lışmalarında ise bir amino asit türevi olan 2-Amino izobuti- rik asit (2AIB) kullanıldı. 2D0G alınımı çalışmalarında, transportun 10 dakika sü re ile lineer olduğu gözlenmiştir. Yapılan efflux deneyleri 2D0G ile doyurulmuş hücrelerin 10 dakika içinde yaklaşık % 35 2D0G geri verdiğini göstermiştir. Taşınımın glukoz tarafından tamamen inhibisyonu 2D0G'un glukoz taşıyıcısı ile taşındığı nı, 2D0G taşınımının metabolik enerjiye ve Na+gradyanına ba ğımlı olmaması ve floretin ile bloke olması ise 2D0G'un len fositlerde kolaylaştırılmış difüzyon ile taşındığını düşün dürmektedir. Zamana karşı AIB'nin transportu incelendiğinde, ilk üç dakikada transportun lineer gittiği daha sonra durduğu- 47 - gözlendi. Ayrıca, AIB ile yüklenmiş lenfositlerde yapılan de neyler, bu sübstratın hücreden geri kaçmadığını (efflux), AIB transport sisteminin metabolik enerjiye bağımlı olduğunu, Na gradyanmdan etkilenmediğini ve L-Lösin ile kısmen inhibisyo na uğradığını göstermiştir. Sonuç olarak, çalışmamızda elde ettiğimiz bulgular in san periferik lenfositlerinde 2D0G transportunun kolaylaştı rılmış difüzyonla AIB'nin ise aktif transportla taşındığını göstermektedir.

- 48 - VIL SUMMARY Glucose and amino acids are the vital nutrients required for the basic functions of cells. The transport rate of these molecules are the rate limiting steps for many intra cellular mechanisms. Therefore, the study of transport mechanisms gives valuable information about the normal and pathological conditions of the cell. In this study, we have attempted to develop a practical method to investigate glucose and amino acid trans port systems in human peripheric lymphocytes. For this reason, 2-Deoxyglucose (2D0G) was used in the glucose trans port studies and 2-aminoisobutyric acid was used in the amino acid transport studies. 2D0G transport was observed to be linear for ten minutes. Efflux studies showed that 35% of 2D0G escaped from the previously loaded cells in ten minutes. Complete inhibi tion of the 2D0G transport by glucose verifies that glucose and 2D0G are carried by the same transport system. The fact that 2D0G transport is independent of both sodium gradient and metabolic energy, and that it is inhibited by phloretin led us to believe that 2D0G is transported by facilitated diffusion. When AIB transport was investigated, it was found that AIB transport was linear for the first 3 minutes. Efflux- 49 - experiments showed that AIB did not escape from the cells. In addition, AIB transport was dependent on metabolic energy, was independent of sodium gradient and was partially in hibited by L-leucine. In conclusion, our results showed that 2D0G is transported by facilitated diffusion whereas, AIB is trans ported by active transport in human peripheric lymphocytes.