K562 ve MEL hücre modelinde G proteinlerinin farklılaşma üzerindeki rolünün incelenmesi

Abstract

ÖZET Kültür ortamında çoğaltılan K562 ve MEL hücreleri kimyasal maddelerle farklılaşmaya indüklendiler. Diferansiyel santrifüj işlemlerinden sonra ham hücre özütünden S-30 (post mitokondri) ve P-30 (membran) kesimleri elde edildi. Bu ke simlerde GTP bağlama etkinlikleri incelendi. K562 hücrelerinin membran kesimlerinde F (farklılaşmış) grubunun GTP bağlama etkinliği K (kontrol) grubuna göre iki kat daha fazla bulunmuştur. Oysa MEL hücrelerinin K grubunda GTP bağlama etkinliği F grubuna oranla iki mislidir. GTP bağlama etkinliklerindeki farkın yanısıra, G protein miktarlarında da farklar olup olmadığının saptanması amacıyla ham hücre özütü, S-30 ve P-30 ke simlerinde özgün antikorlar kullanarak `Western Blot` analizleri yapıldı. Blot' ların dansitometrik analizinde K ve F grupları arasında anlamlı bir fark gözlenemedi. 53-

SUMMARY K562 and MEL cell lines grown in suspension culture xere chemically indu ced to differentiate with hemin and DMSO respectively. After differential centrifu- gation, the crude cell extracts, S-30 (post-mitochondria) and P-30 (membrane) fractions were obtained and GTP-binding assays were performed in these fracti ons. The cell membranes of the differentiated K562 cells showed a twofold incre ase in GTP-binding activity with respect to the control groups, whereas in MEL cells, the GTP-binding activity of the control cell membranes was twofold greater than that of the differentiated membranes. Western blot analysis using specific antibodies was done to determine whether there were differences in G protein amounts between the control and dif ferentiated cells. Densitometric measurements on the blots indicated that there were no significant differences in the total amounts of G protein upon differen tiation of K562 and MEL cells. -54-