Morfin bağımlılığında Nw-Nitro-L-Arjinin`in rolü

Abstract

ÖZET Opioidler muhtelif beyin bölgelerindeki ve omurilikteki u., S ve k olarak isimlendirilen üç temel reseptörleri aracılığıyla ağrı uyarısını önlerler. Tolerans ve bağımlılık oluşturmaları onların klinik kullanımını kısıtlamaktadır. Bazı çalışmalarda tolerans ve bağımlılıkta opioid reseptörlerinin sayı ve afînitesindeki değişikliklerin etkili olduğu ileri sürülmektedir. Öte yandan son zamanlarda Nitrik Oksit (NO) 'in opioid toleransı ve bağımlılığında önemli rolü olduğu hipotezi desteklenmekte ve de akut morfin uygulamasının NO sentaz (NOS) aktivitesini stimüle ettiği ileri sürülmektedir. Son yıllarda NOS înhibitörleri (NOSİ)'nin morfine tolerans ve bağımlılık gelişimini ve de morfin yoksunluk sendromunun temel bazı belirtilerini inhibe ettiği bildirilmiştir. Bunun yanısıra, NO pekçok proteinin S-nitrozilasyonunu uyarabilir. NO tarafından proteinlerin ve reseptörlerin nitrozilasyonları onları inhibe eder. Bu bulgular NO 'nun morfine tolerans ve bağımlılık gelişiminde reseptör bağlanmasını modüle edebileceğini düşündürmektedir. Çalışmamızda, sıçanlar 4 gruba ayrıldı. 11 gün boyunca 1. gruba serum fizyolojik, 2. gruba L-Nitro Arjinin (4 mg/kg/gün) (kontrol grupları), 3. gruba Morfin (gün aşırı artan dozlarda), 4. gruba da morfin + L-Nitro Arjinin uygulandı. Sıçanların beyin ve omurilik membranlarındaki fi, 8 ve k opioid reseptörlerinin sayı ve afinitelerini tespit etmek amacıyla saturasyon deneylerinde sırasıyla [3H]-DAGO (1-30 nM), [3H]-Ile5<5 Deltorfin II (0.05-7.5 nM) veya [3H]-EKC (1-40 nM) kullanıldı. Kompetisyon çalışmalarında, [3HJ- NX (1 nM) bağlanmasının M-HCI (İO^-IO'12 M) and L-NArj (10`J- 10*10M) tarafından inhibisyonu test edildi. Kontrol grupları ile karşılaştırıldığında u,, S ve k opioid reseptörlerinin sayı ve afinitelerinde gruplar arasında istatistiksel farklılıklar olmadığı bulundu. Ayrıca, L-NArj (10'3-10-10M)'in [3H]- NX (1 nM) bağlanmasını inhibe etmediği de tespit edildi. Çalışmamızda reseptör sayı ve afinitelerinde bir değişiklik olmaksızın kronik morfin uygulamasına bağımlılık geliştiği görüldü. Kronik Morfin + L-Narj uygulamasının bağımlılık gelişimini reseptör sayısında bir değişiklik oluşturmaksızın azalttığı tespit edildi. Sonuç olarak kronik morfin uygulaması hedef nöronlarda itraselüler ikinci haberci sistemi değiştirebilir ve NOSİ'leri L- Arjinin-NO-cGMP yolağını inhibe ederek opioidler tolerans ve bağımlılık gelişimini azaltabilir. 69

SUMMARY Opioids relieve painful stimuli by interacting with three major types of receptors, namely jj,, 8 and k in various brain regions and spinal cord. The clinical usefulness of opioids is limited, however, by tolerance and dependence. Some studies have suggested the involvement of the changes in the number and affinity of opioid receptors in tolerance and dependence. On the other hand recent evidence supports the hypothesis that Nitric Oxide (NO) mediates opioid tolerance and dependence, and also suggesting that acute morphine treatment stimulates NO Synthase (NOS). Recently It was reported that NOS Inhibitors (NOSIs) prevented the development of morphine tolerance and dependence, and also inhibited some of the major signs of morphine abstinence syndrome. In addition, NO can stimulate the S-Nitrosylation of many proteins. Nitrosylation of proteins or receptors by NO inactivates them. These findings point to the possibility that NO may modulate receptor binding on morphine tolerance and dependence. In our present study, the rats were divided to the four groups. First and second groups were treated with serum physiologic and L- Nitro Arginine (L-NArg; 4 mg/kg/day), a NÖSI as controls, third and fourth group rats received morphine HCI and M-HCI + L-NArg for eleven days, respectively. In saturation binding studies, [ H]- DAGO (1-30 nM), [3H]-Ile5'6 Deltorphine II (0.05-7.5 nM) or [3H]- EKC (1-40 nM) were used to determine jj., 8 and k opioid receptor densities (Bmax ) and affinities (KD) in rat brain and spinal cord membranes. In Competition studies. Inhibition of [3H]-NX (1 nM) binding were performed by M-HCI (lO^-lO`12 M) and L-NArg (10'3- 10-10M). The densities and affinities of rat brain and spinal cord opioid receptors (jj., 8 and tc) were found no statistically differences between groups when compared controls. L-NArg (10`3-10`10 M) did not produce any inhibition on the antagonist (1 nM [3H]-NX) binding on the rat brain and spinal cord membranes. Our studies shown that chronic morphine treatment developed dependence without any statistically changes in opioid receptor densities and affinities. Chronic Morphine + L-Narj treatment was attenuated development of dependence without changes in opioid densities and affinities also. In conclusion, chronic morphine treatment may be modulates intracellular second messenger system in target neurons and NOSIs may be attenuate development of opioid tolerance and dependence due to inhibit L-Arginine-NO-cGMP pathway. 70