Flukonazal, amfoterisin B ve interferon Alfa-2a kombinasyonlarının insan polimorf nüveli lökositlerinin kemotaksisi ve Candida Albicans`a karşı hücre içi ölüm aktivitesinin in vitro araştırılması

Abstract

62- Ö ZET Bu çalışmada Flukonazol (FLU), Amfoterisin B (AmB) ve bunların inter feron oc-2a (IFN oc-2a) ile erişilen serum konsantrasyonlarmdaki (16 (ig/ml, 2 (ig/ml, 10 IU/ml) kombinasyonlarının insan polimorf nüveli lökositlerinin (PNL) kemotaksisi ve Candida albicans'ı hücre içi öldürme aktivitesi in vitro araştırılmıştır. İnsan PNL'leri (5xl06 hücre/ml) sağlıklı deneklerden EDTA'lı tüplere alınan venöz kandan Ficoll-hypaque gradient santrifüj yöntemi ile ayrılmış, tri- pan mavisi boyama yöntemi ile canlılık > %98 olarak tespit edilmiştir. PNL kemotaksisi Nelson'un agaroz altı yöntemi ile yapılmıştır. PNL'lerin kemotaktik faktöre göç uzaklığı FLU için 5.02 ± 0.04 mm, AmB için 5.02 ± 0.07 mm, FLU + IFN cc-2a için 5.30 ± 0.00 mm, AmB + IFN a-2a için 5.30 ± 0.00 mm ve IFN a-2a için 5.00 ± 0.00 mm olarak ölçülmüştür. Bu sonuçlara göre FLU + PNL, AmB + PNL ve IFN a-2a + PNL'lere göre FLU + IFN a-2a + PNL ve AmB + IFN a-2a + PNL kombinasyonları PNL ke- motaksisini anlamlı bir şekilde artırmıştır (P< 0.001). FLU, AmB, IFN a-2a,FLU + IFN a-2a, AmB+ IFN a-2a kombinasyonu nun PNL'ler içinde Candida albicans 'm (1x10 ' kob/ml) hücre içi ölümü üzeri ne etkisi (0.,30. ve 90. dakikada) canlı koloni sayımı yöntemi ile saptanmıştır. Bu sonuçlara göre AmB (2 fig/ml) + IFN oc-2a (10 IU/ml) kombinasyonu nun PNL'lerin hücre içi öldürme aktivitesi 30. dakikada FLU (16 ug/ml)+ IFN a-2a (10 IU/ml) kombinasyonuna göre daha fazla olmuştur. 90. dakikada ise bu kombinasyonların hücre içi öldürme aktivitesi birbirine yakın bulunmuş tur. Terapötik konsantrasyonda FLU, AmB, FLU + IFN oc-2a, AmB+ IFN a- 2a kombinasyonları, Candida albicans blastokonidayasmın PNL'ler içinde ölümüne etkisini 30. ve 90. dakikalarda kontrol PNL'lere göre anlamlı olarak arttırmıştır (P<0. 0001).

-63 SUMMARY Intracellular killing of Candida albicans by human Polymorphonuclear leu kocytes (PMN) and their chemotaxis at therapeutic concentrations of Fluconazole (FLU) (16 jig/ml), Amphotericin B(AmB) (2 )ig/rnl), and their combinations with In terferon a-2a (INF a-2a) (10IU/ml), were investigated in vitro. Peripheral venous blood was collected in EDTA from healthy donors and PMN (5xl06 cell/ml) were isolated by Ficoll - hypaque gradient centrifugation, via bility of cells assessed by tripan blue exclusion was >98%. Chemotaxis of PMNs was estimated by Nelsons under agarose method. Mig ration of PMNs towards the chemotactic factor was found for FLU 5.02±0.04mm, for AmB 5.02±0.07mm, for FLU+INF a-2a 5.30±0.00mm, for AmB +INF a-2a 5.30±0.00 mm and and for INF a- 2a 5.00 ±0.00mm. Intracellular killing of Candida albicans (lxlO7 CFU/ml) in PMNs by FLU, AmB, FLU +INF a-2a, AmB +INF a-2a and INF a-2a were detected by live co lony counting method at the beginnig and after 30., 90. minutes of exposure. Intracellular killing activity of AmB (2 ig/ml) + INF cc-2a (10 IU/ml) was gre ater than FLU (16 ug/ml)+ INF oc-2a (10 IU/ml) at 30. minutes. But at 90. minutes it was found approximate. As a result PMN chemotaxis was significantly increased with FLU+INF cc- 2a + PMN and AmB+INFa-2a, +PMN (P<0.001). Intracellular killing of Candida albicans in PMNs by FLU, AmB, FLU+INF a-2a, AmB+ IN a-2a, were signifi cantly increased when compared with controls (P<0.0001).