Normal ve aterosklerozlu olguların trombositlerinde glukoz-6-fosfat dehidrogenaz (G-6-PD) karakterizasyonu
- Global styles
- Apa
- Bibtex
- Chicago Fullnote
- Help
Abstract
IV - ÖZET Bu çalışmamızda normal ve aterosklerozlu olguların trombositlerinde pentoz fosfat yolunun önemli bir enzimi olan Glukoz-6-fosfat dehidrojenazın (G-6-PD) karakterizasyonuna gidildi. Normal olguların trombositlerinde (NH4)2S04 presipitasyonu, Sephadex G-200 kolon kromatografisi ile G-6-PD başlangıca oranla 2.1 kere saflaştınldı. Molekül ağırhğımn SDS-PAGE ile 62.000 dalton, HPLC ile 79.000 dalton olduğu gözlendi. Glukoz-6-fosfat (G-6-P) için Km değeri 0.033 mmol/L, Vmax değeri 77 mU/109 trombosit koenzim NADP+ için Km değeri 0.009 mmol/L, Vmax değeri 65 mU/109 trombosit olarak bulundu. Enzim mekanizmasının üçlü kompleks mekanizmasına uyduğu, optimum temperatürünün 25°C de 25 dakika da % 73 olduğu saptandı. Trombosit G-6- PD'ın 0.5 ug/ml adrenalin ile % 37 sekresyona uğradığı gözlendi. G-6-PD aktivitesi 25°C de pH=7.6 da 42 normal olguda 64.24±19.91 mU/109 trombosit iken koroner arter hastalığı anjiografi ile gösterilmiş olan 27 aterosklerozlu olguda 43.48±12 mU/109 trombosit olarak bulundu. Bu % 32.32'lik eksikliğin istatistiksel bakımdan anlamlı olduğu saptandı. Aterosklerozlu olgularda, G-6-P ve NADP+ için Km değerleri normallerle aym çıkmasına karşın Vmax değerlerinde anlamlı bir azalma gözlendi. Aterosklerozlu olgularda G-6-P için Vmax değeri 48 mU/109 trombosit ve NADP+ için Vmax değeri 40 mU/109 olarak saptandı. Aterosklerozlu olguların trombositlerinde G-6-PD aktivitesinin azalmasının nedeni trombositlerin hiperaktif bir şekilde bulunup dolaşımda sekresyona uğradığı görüşüne varıldı. - V SUMMARY Characterization of Human Platelet G-6-PD in Normal and in Atherosclerotic Cases This work involves the characterization of platelet Glucose-6-phosphate dehydrogenase (G-6-PD), an important enzyme of pentose phosphate pathway, in normal and atherosclerotic cases. Platelet G-6-PD was purified 2.1 times with (NH4)2S04 precipitation and Sephadex G-200 column chromatography from normal cases. The molecular weight was found as 62,000 dalton with SDS-PAGE and 79,000 dalton with HPLC. For Glucose-6-phosphate (G-6-P) the Km value was 0.033 mmol/L, Vmax was 77 mU/109 platelets and for koenzyme NADP+ Km was 0.009 mmol/L and Vmax was 65 mU/109 platelets. Enzyme mechanism followed ternary complex mechanism. Optimum temperature was 25°C and thermal stability was 73% at 25°C for 25 min. 37% of platelet G-6-PD was released with 0.5 pg/ml adrenalin induced secretion. Platelet G-6-PD activities were found in the normal and atherosclerotic cases with coronary arterial disease as 64.24±19.91 mU/109 platelet and 43.48±12 mU/109 platelets, respectively. This deficiency of 32.32% it atherosclerosclerotic cases was found to be statistically significant. In the atheroscherotic cases for G-6-P and for NADP+, Km values were same as the normals but Vmax values were 48 mU/109 platelets and 40 mU/109 platelets, respectively. The decreased levels of platelet G-6-PD in the atherosclerotic subjects is tought to be due to the platelets being in the hyperactive state and like other releasable substances located in the granulae, G-6-PD is released during circulation in atherosclerotic cases.
Collections