Behçet hastalarında HLA-B51 genotiplerinin incelenmesi

Abstract

1. ÖZET Behçet hastalığı üveit, ağız ve genital ülserleri içeren üçlü bulguyla tanımlanmaktadır ve hastalığın etyopatogenezi tam olarak bilinmemektedir. Hastalığın olası multifaktöryel kalıtsal bağlantılarını destekleyen birçok kanıt bulunmaktadır. Özellikle HLA-B51 ile Behçet hastalığı ilişkileri Japonya, Yunanistan, İran ve Türkiye gibi birçok ülkede gösterilmiştir. Bu ilişkiler Behçet hastalığı araştırmalarını genetik karakteristikleri ve ilişkilerine doğru genişletmiştir. Moleküler yöntemlerdeki gelişmelerle daha önce serolojik olarak tanımlanamayan HLA-B51 allel sayısında büyük artış bulunmaktadır. Bu çalışmada HLA-B51 allellerinin genotipi ve bu allellerin, Behçet hastalığındaki ekspresyonunun rolünü araştırmayı amaçladık. Daha önce Behçet hastalığında rapor edilmiş, yüksek oranda HLA-B*51011 allelinin bulunması nedeniyle, olası ilişkiyi incelemek amacıyla bu alleli model sistem olarak kullandık. HLA-B*51011 gen ekspresyonunun incelenmesi için çalışmadaki yaklaşımımız RT-PCR sisteminin kullanımına dayanmaktadır. Bu strateji içerinde gerekli olan tüm primer ve probların tasarımı laboratuvarımızda yapılmıştır. Asemptomatik sağlıklı bireylerde HLA-B51 bölgesini içeren PCR ürünlerini gözlemedik. Bu nedenle Behçetli hastalardaki HLA-B51 ekspresyonunu etkileyen etkenler dikkatimizi çekti. 100 Behçet hastadan 44 tanesinde HLA-B51 bölgesine ait RT-PCR sonuçlan elde edilebilmiştir. Bu sonuçlarda B*51011 allelinin ekspresyonunu tanımlamak ve doğrulamak amacıyla, hibridizasyon deneylerinde, 6 farklı oligonükleotid prob kullanılmıştır. Sonuç olarak, Behçet hastalarında HLA-B51 ekspresyonunu %17 ve HLA-B*51011, B*51012 ve B*5108/5109 allel sıklığı ise, aynı sıra ile, %14, %2 ve %1 olarak saptanmıştır. Diğer taraftan eksprese olan alleller ile klinik bulgular arasında bir ilişki gözlenmemiştir. Bu çalışmada, HLA-B51 ekspresyonunun RT-PCR yöntemi ile bu ekspresyonun genomdaki sıklığının saptanması ve de HLA-B51, Behçet hastalığı ilişkilerindeki moleküler etkileşimlerin ortaya konulması için daha çok sayıda hastada incelenmesi gerekliliği kanısına vardık.

2. SUMMARY Behcet's disease is diagnosed with triple symptoms as uveitis, oral and genitale ulsers. The etiopathogenesis of Behcet's disease is not well understood phenomenon. There are many scientific evidences supporting the possible multifactorial genetic linkages of the disease. Especially, the relationship in between HLA-B51 and Behcet's disease is shown in many populations such as Japon, Greek, Iran, Turkey etc. These relationships extended the Behcet's disease researches into the genetic characteristics and possible relations for the disease. Due to the development of molecular techniques, there are numerous increase in the HLA-B51 alleles which previously could not be identified serologically. In this study, we aimed to investigate the role of the HLA-B5 1 alleles and their expression at Behcet's disease. Since high frequency of the HLA-B*51011 allele has been reported previously in Behcet's disease, we used the HLA-B*51011 allele as a model system for the possible allelic relationship for the investigation. Our investigation approach stand on the use of RT-PCR system for the examination of the HLA-B*5101 1 gene expression. All the primers and probes required for the RT-PCR strategy were designed in our laboratory. We did not observe PCR products spanning the HLA-B51 region with healthy asymptomatic individuals. Therefore, we pointed out the factors influencing the HLA- B5 1 expression in patients with Behcet disease. We obtained RT-PCR positive results with 44 out of 100 patients with Behcet's disease. To be able to identify and confirm the expression of HLA B*51011 allele, we used 6 different oligonucleotide probes in hybridisation experiments. As a result, we determined the HLA B51 expression as 17 %, and of the frequency for B*51011, B*51012 and B*5108/5109 alleles, 14 %, 2 % and 1 % respectively, expressing HLA B51 in Behcet's disease. We also observed that there is no relation in between the expressed alleles and clinical symptoms of the Behcet's disease. We conclude that the molecular interaction in between the expression of HLA B51 and Behcet's disease should be investigated in large number of patients by RT-PCR technique, for the presence of the allele frequency in genomic structure.