Metisiline dirençli Staphylococcus aureus suşlarında mecA geninin PCR (polimeraz zincir reaksiyonu) metodu ile saptanması

Abstract

IV ÖZET Bu çalışmada, çeşitli hastanelerden temin edilen 133 adet metisiline dirençli Staphylococcus aureus suşlarında mecA geninin varlığı, Polimeraz Chain Reaction (PCR) metodu ile araştırılmıştır. Çalışmada öncelikle çeşitli hastanelerden temin edilen suşlar, muhafaza ve rutin kullanım için uygun besi yeri ortamlarına ekim yapılarak çalışmaya alınmıştır. Bu suşlara, klasik fenotipik tiplendirme metotlarından okzasilin antibiyotiğine karşı disk difüzyon metodu ve Minimum İnhibisyon Konsantrasyonu (MİK) Epsilometre testi (E testi) uygulanmış ve okzasiline karşı hassasiyet testleri gerçekleştirilmiştir. Daha sonra her suş için, koloni PCR metodu kullanılarak mecA geninin varlığı araştırılmıştır. PCR sonucunda oluşması beklenen 533 bp büyüklüğündeki mecA geni, %1 agaroz jelde incelenmiştir. Koloni PCR sonucunda 127 suş için rnecA pozitif ve 6 suş için de mecA negatif olarak tespit edilmiştir. Ayrıca fenotipik testler sonucunda, 14 suş okzasiline hassas olarak tespit edilmesine rağmen, bu suşlar için PCR sonucunda mecA pozitif olarak tespit edilmiştir. Bu sonuç da S. aureus'un antibiyotik direncinin PCR ile daha hassas olarak tespit edildiğini ortaya koyar. Moleküler teknikler, özellikle PCR metodu stafilokokların metisilin direnç tipinin hızlı, spesifik ve doğru tespiti için gereklidir. Ve mecA geninin moleküler metotlarla tespiti metisilin direncini doğrulamak için referans metottur. Klasik metotlar az güvenilirdir ve en azından 24 saat gerektirir. Ayrıca klasik metotlar, büyük oranda büyüme ortamı şartlarına bağlıdır ve bu yüzden yeterli ayırımı sağlayamazlar. PCR S. aureus` un antibiyotik direnç genlerinin hassas ve spesifik tespitini sağlar. Anahtar kelimeler: Staphylococcus aureus, Metisilin direnci, mecA geni, PCR

ABSTRACT In this study, the 133 methicillin resistant strains of Staphylococcus aureus (S. aureus) obtained from various hospitals were tested for presence of the mecA gene using Polymerase Chain Reaction (PCR) method. First, these strains were streak on to appropriate medium for routine use and long term storage. The strains were then analysed using conventional phenotypic methods such as disk diffusion method, minimum inhibition concentration (mic) epsilometer test (E test). After these phenotypic tests, detection of the mecA gene for each strain carried out using colony PCR method. The PCR products were then analysed for the 533 bp mecA gene product in a %1 agarose gel. The analyses of the PCR products showed that from the 133 strain tested, 127 were the mecA positive, 6 were the mecA negative 14 strains were both oxacillin susceptible and mecA positive. The latter indicates that PCR is more sensitive method for determination of S.aureus antibiotic resistance. Molecular techniques, especially PCR method, are necessary for fast, specific and accurate detection of Staphylococcus meticillin resistance pattern. The confirmation of presence of the mecA gene by molecular methods is a reference method. The conventional phenotypic methods are less accurate and take at least 24 hours. In addition, the conventional methods are easily affected by environmental conditions such as temperature and medium osmolality. Therefore, the PCR method represents a sensitive, specific and powerful method for detection of S. aureus antibiotic resistance. Key words: Staphylococus aureus, Meticillin resistance, mecA gene, PCR.