Endotel hücrelerde oksitosinin ve seks hormonlarının (Östrojen, Progesteron) C Tip Natriüretik Pepti sentezi üzerindeki etkilerinin incelenmesi

Abstract

Amaç: Natriüretik peptitler, atrial natriüretik peptit (ANP), B-tip natriüretik peptit (BNP), ve C-tip natriüretik peptit (CNP) kalp damar sisteminde önemli rolleri olan hormonlardır. CNP başlıca endotelyumdan salınan ve vazodilatör etki göstererek damar sağlığına önemli katkıları olan antiaterosklerotik bir peptitdir. ANP ve BNP'nin, CNP ekspresyonunu arttırdığı sığır aort endotel hücrelerinde in vitro olarak gösterilmiştir. Oksitosin ANP'nin salgılanmasını arttırarak kalp-damar sisteminde etki gösteren bir hormondur. Östrojen ve progesteron ise oksitosin ve oksitosin reseptörünün ekspresyonunun kontrolünde önemli steroid hormonlardır. Bu çalısmada amaç oksitosin, östrojen ve progesteronun endotel hücrelerinde CNP ekspresyonu üzerindeki etkilerini incelemektir.Yöntem: İnsan umbilikal ven endotel hücre kültürleri (HUVEC) oksitosin, östrojen ve progesteronun tek başlarına ve değişik kombinasyonlar halinde 100'er nM konsantrasyonda eklenmesiyle 24 saat süreyle ile inkübe edilmiş ve hormonların CNP geninin ekspresyonu üzerindeki etkileri Taqman® problar kullanılarak gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) ve CNP protein düzeyinde etkisi ise, Western Blot teknikleri ile araştırılmıştır.Bulgular: Gerçek zamanlı PZR deneyleri, progesteron ve östrojenin, kontrol grubuna göre CNP ekspresyonunu arttırdığını göstermektedir. Diğer hormonlarla beraber verildiğinde oksitosinin, CNP ekspresyonu üzerinde azaltıcı etkisi olduğu görülmüştür. Western blot tekniği ile hücre içi CNP düzeyleri belirlenememiştir. Bunun nedeni, CNP'nin hücre lizatında deteksiyon limitinin altında miktarlarda (<50ng) bulunması veya sinyal peptiti olduğu için sentez sonrası derhal sekrete edilmesi olabilir.Sonuç: Bulgularımız, oksitosin ve steroid hormonların endotel hücrelerinde CNP sentezini etkileyebileceklerini ve bu hormonların damar üzerindeki etkilerinin bazılarının CNP aracılığıyla gerçekleşebileceğini göstermektedir.Anahtar sözcükler: C Tip Natriüretik Peptit, Gerçek Zamanlı PZR, Oksitosin, Östrojen, Progesteron

Natriuretic peptites, atrial natriuretic peptite (ANP), B-type natriuretic peptite (BNP), and C-type natriuretic peptite (CNP) are hormones which have important roles in the cardiovascular system. C-type natriuretic peptite which is mainly produced in vascular endothelial cells has protective effects on vasculature due to its vasodilative and antiaterosclerotic properties. In vitro experiments have shown that CNP expression is stimulated by ANP and BNP in the bovine aortic endothelial cell culture. Oxytocin is a hormone which has effects on cardiovascular system mediated by increasing ANP secretion.Estrogen and progesteron are steroid hormones which regulate the expression of oxytocin and its receptor. The aim of this study is to investigate the effects of oxytocin, estrogen, progesteron on the expression of CNP in edothelial cells.Method: Human umbilical vein endothelial cell cultures (HUVEC) were incubated with 100 nM estrogen, progesterone, oxytocin alone or in various combinations for 24 hours and the effect of hormones on CNP expression were evaluated by Real Time PCR using Taqman® probes and Western Blotting tecniques.Results: Real Time Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) assays have demonstrated that estrogen, progesterone increase CNP expression in endothelial cells compared to controls. Oxytocin combined with other hormones attenuated the their effect. The changes in CNP protein level could not be detected with Western Blotting. This may be due to the presence of CNP in concentration lower than the detection limit (<50 ng) or its secretion right after synthesis.Conclusion: Our results demonstrate that oxytocin and the steroid hormones estrogen and progesterone can influence CNP synthesis in endothelial cells and can be partly responsible from the effects of these hormones on the vascular system.Key words: C Type Natriuretic Peptide, Estrogen, Oxytocin, Progesterone, Real Time PCR