Oosit olgunlaşmasında nitrik oksitin rolü

Abstract

Memeli oositlerinde, mayoz bölünme erken embriyonik dönemdebaslamasına regmen, GV asaması olarak da adlandırılan profaz I'den öteyegidemez. Oosit maturasyonu, oositin, hipofiz bezinden gelen LH dalgası ilemayoza devam etmesi olarak adlandırılablir. Nitrik oksitin (NO), fare oositmaturasyonunda nasıl bir rol oynadıgı halen tamamıyla aydınlatılmıs degildir. Bizde çalısmamızda NO'nun maturasyondaki rolünün halkasal nükleotidfosfodiesterazlarla (PDE) ilgisi olup olmadıgını arastırmayı amaçladık. Bununiçin, 21-28 günlük farelerden topladıgımız oositleri, hücre içi PDE aktivitesinidogrudan veya dolaylı olarak etkileyen farklı ajanlar içeren medyumlarda, aynıkültür sartlarında kültüre ettik. NO üreten NOS enzimini bloke etmek için 1 mML-NAME (LN) kullandık. Oositteki hakim PDE izoformu PDE3A'yı baskılamakiçin 4 mM konsantrasyonda hipoksantin (HX) kullanıldı. Üçüncü bir deney grubuolarak HX ve LN içeren medyumların birebir orandaki karısımı kullanıldı(HX+LN). Kontrol grubuna ise hiçbir kimyasal eklenmedi. COC'lar 2, 4, 6, 8, 10,20 ve 24. saatlerde incelenerek maturasyon asamaları açısından degerlendirildi.Deneyler sonucunda kontrol grubu en yüksek maturasyon oranını eldeederken, hipoksantin eklenen gruptaki oositler 24 saatin sonunda bile çok düsükoranda maturasyon gerçeklestirerek GV asamasında kalmıstır. LN grubundamaturasyon, 8. saate kadar, kontrol grubu ile benzer sekilde yüksek oranlardagerçeklesmis ancak oositlerde meydana gelen dejenerasyon nedeniyle 24 saatinsonunda kontrol grubuna göre anlamlı derecede düsük oranda kalmıstır. HX+LNgrubunda maturasyon ilk 6 saatte baslamazken deney sonunda LN grubunundegerlerine ulastı. HX+LN grubunda, deneyin ilk altı saatinde HX grubundakigibi sıfır olan maturasyon degerlerinin, deneyin ilerleyen saatlerinde L-NAMEetkisiyle yükselmesi; fare oositlerinde, hücre içinde sentezlenen NO'nun, cGMParacılıgıyla PDE3A üzerinden maturasyonu geciktirdigini ortaya koymustur.

In mammalian oocytes, meiosis starts at the early embryonic period butbecomes arrested at the prophase I stage which is also termed the GV stage.Oocyte maturation can be termed as the reinitiation of the meiosis fallowing LHsurge from the pituitary gland. The role of Nitric oxide (NO) on mouse oocytematuration is not clarified yet. We aimed to investigate the role of NO if it?srelated with the cyclic nucleotide phosphodiesterases (PDEs) or not. Oocytesisolated from 21-28 days old mice and cultured in the same culture conditionswith different agents which manipulate activity of PDE directly or indirectly. LNAME(1 mM) was used to inhibit, NO producing enzyme, NOS. Hypoxanthine(HX) (4 mM) is used to inhibit PDE3A, dominant PDE form of the oocyte. Athird group consisted of the 1:1 mixture of fist two medium (HX+LN). Noadditives used in control group. Oocytes were examined at 2, 4, 6, 8, 10, 20 and24th hours for the maturation stage.Oocytes in HX medium showed very low maturation rates and stayed at GVstage at the end of the 24 hour while control oocytes reached maximummaturation rates. LN group oocytes maturated like the control group until 8th hourbut total maturation rate remained significantly low at the end of the experimentbecause of the high degeneration rates. Maturation didn?t start at the HX+LNgroup for first six hour but reached the LN group at 24th hour. The increase ofmaturation rates at the HX+LN group with the effect of L-NAME after the sixthhour of the experiment which is zero before, showed that; intracellularysynthesized NO delays mouse oocyte maturation via inhibiting PDE3A withcGMP.