Pankreatik duktal adenokarsinoma hücrelerinde miRNA`nın, otofaji üzerinde düzenleyici etkisinin değerlendirilmesi

Abstract

ÖZETPANKREATİK DUKTAL ADENOKARSİNOMA HÜCRELERİNDE miRNA'NIN, OTOFAJİ ÜZERİNDE DÜZENLEYİCİ ETKİSİNİN DEĞERLENDİRİLMESİPankreas kanseri bugün ve yakın gelecekte en düşük hayatta kalma oranının gözlendiği en ölümcül kanser türlerinden biri olmaya devam edecek gibi görünmektedir. mirRNA'ların hücre çoğalması, farklılaşması ve ölümüne ilişkin biyolojik olaylardaki etkin rolleri, kanserle ilişkisine olan ilginin artmasına yol açmıştır. Bu çalışmanın da amacını, otofajinin miRNA ile gen düzeyinde kontrol edilerek pankreas kanseri gelişiminin engellenebilirliğinin araştırılması oluşturmaktadır. Çalışma kapsamında Panc-1 ve MiaPaCa-2 hücrelerine miR196a'nın transfeksiyonu sonrası Beklin-1 ve Atg5 mRNA ekspresyonu ve Beklin-1, Atg5 ve Atg12 protein ekspresyon seviyeleri belirlenmiştir. Hücrelerde sitotoksisite oluşturmayacak bir konsantrasyonda (50 nM) kullanılan miR-196a inhibitörü için, Panc-1 hücreleri canlılığı % 61.33 ± 0.56 ve diğer MiaPaCa-2 hücreleri ise % 52.88 ± 2.04 düzeylerinde bulunmuştur. miR-196a inhibitör uygulamasıyla, Panc-1 hücrelerinde Beklin-1 ve Atg5 gen ekspresyonları sırasıyla % 63 ve % 22 düzeylerinde gerçekleşmiştir. Beklin-1 protein ekspresyonu (% 89), Panc-1 ve MiaPaCa-2 hücreleri arasında farklılık göstermemiştir. Panc-1 ve MiaPaCa-2 hücreleri arasındaki en önemli farklılık Atg12 proteini expresyonunda (Panc-1 için % 67 azalış, MiaPaCa-2 için % 50 artış) bulunmuştur. Çalışma sonuçları, önceki bazı araştırmalarda Beklin 1 ekspresyonunun azalmasının otofajik aktivitenin artmasına yol açabileceği değerlendirmeleriyle uyumlu bulunmuştur.Anahtar Kelimeler: miRNA, miR196a, pankreas kanseri, otofaji.

ABSTRACTTHE EVALUATION OF REGULATORY EFFECT OF miRNA ON AUTOPHAGY IN PANCREATIC DUCTAL ADENOCARCINOMA CELLSPancreatic cancer appears to continue to be one of the deadliest cancer types in the world today and in the near future with the lowest survival rate. The active roles of miRNAs in biological events related to cell proliferation, differentiation and death have led to an increased interest in cancer. The aim of this study is to investigate the inhibition of pancreatic cancer development by controlling gene expression of autophagy with miRNA. In the study, Bekin-1 and Atg5 mRNA expression and Beklin-1, Atg5 and Atg12 protein expression levels were determined in Panc-1 and MiaPaCa-2 cells after transfection of miR196a. For the miR-196a inhibitor, which was used at a concentration (50 nM) that would not produce cytotoxicity in the cells, the viability of Panc-1 cells was 61.33 ± 0.56 % and the other MiaPaCa-2 cells were found at 52.88 ± 2.04 %. With the miR-196a inhibitor application, the Beklin-1 and Atg5 gene expressions in Panc-1 cells were 63 % and 22 %, respectively. Beklin-1 protein expression (89 %) did not differ between the Panc-1 and MiaPaCa-2 cells. The most significant difference between the Panc-1 and MiaPaCa-2 cells was found in Atg12 protein expression (67 % decrease for Panc-1, 50 % increase for MiaPaCa-2). The results of the study were consistent with the findings that in some previous studies, decreased Beklin 1 expression might lead to an increase in autophagic activity.Key words: miRNA, miR196a, pancreatic cancer, autophagy.