Mezenkimal kök hücrelerin kimyasal olarak indüklenmiş endometrial yaşlanma modeli üzerine etkisi

Abstract

Amaç: Bu çalışmada insan endometrial epitelyal hücre hattında (RL95-2) hidroksiüre (HU) kullanılarak oluşturulmuş kimyasal yaşlanma modeli ile insan mezenkimal kök hücrelerinin (iMKH) ko-kültürü sonrasında, endometrial hücreler üzerindeki yaşlanma belirteçlerindeki değişimin analizi amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem: Çalışma dört grupta yapılmıştır. (i)Kontrol grubu RL95-2, (ii)HU uygulaması ile yaşlandırılan RL95-2, (iii) HU ile yaşlandırılan ve sonrasında iMKH ile ko-kültür edilen RL95-2, (iv)yaşlandırma olmaksızın iMKH ile ko-kültür edilen RL95-2 hücreleri. Kültür süreleri sonunda hücreler X-gal boyaması, p16Ink4a ve Lamin-B1 antikorlarıyla immünositokimya boyaması yapılmıştır. qRT-PCR analiziyle p16Ink4a ve IL-6 mRNA ifade seviyeleri, hücre kültür vasatlarında IL-1α ve IL-6 ELISA analizi ile protein seviyeleri belirlenmiştir.Bulgular: Çalışma sonuçlarına göre; HU ile yaşlandırılan RL95-2 hücrelerinde kontrole kıyasla p16Ink4a ve IL1α ve IL-6 seviyeleri artmış, Lamin-B1 seviyesi azalmış ve X-gal pozitif hücre oranı yükselmiştir. HU sonrası iMKH ile ko-kültür yapılan grupta yaşlandırma grubuna kıyasla ise p16Ink4a, IL1α ve IL-6 seviyeleri azalmış, Lamin-B1 seviyesi artmış ve X-gal pozitif hücre oranı azalmıştır.Sonuç ve Yorum: Bu bulgular doğrultusunda mezenkimal kök hücrelerin endometrial yaşlanma modeli üzerinde, yaşlanma belirteçlerinde azalmaya sebep olurken, aynı zamanda yaşlanmaya bağlı sekretuvar fenotipi de baskılayarak inflamasyonu da engelleyici etkiler gösterdiği söylenebilir. Daha ileri çalışmalar sonrasında ileri yaş infertilite sebeplerinden birisi olan uterus yaşlanması ve buna bağlı olarak gelişen implantasyon problemlerinde yeni hücresel tedavi yaklaşımları geliştirilebilir. Anahtar Kelimeler: Endometrium, Hücresel Yaşlanma, Kök Hücre

Aim: In this study, it was aimed to evaluate the change of the senescence markers of chemically induced senescent model of human endometrial epithelial cell line (RL95-2) after co-culture with human mesenchymal stem cells (hMSC).Material and Methods: The study was performed at four groups. (i) Control group RL95-2, (ii) HU-induced senesced group RL95-2, (iii) HU-induced senesced before co-cultured with hMSC group RL95-2 and RL95-2 cells that were not senesced but co-cultured with hMSC. After culture period, the cells were stained with X-gal stain for senescence associated ß-galactosidase activity and immunocytochemistry stain were assayed with p16Ink4a and Lamin-B1 antibodies. qRT-PCR was conducted for IL1α and IL-6 -6 expressions. Finally, IL-1α and IL-6 levels on the cell culture media were evaluated by using ELISA. Results: According to findings of the study, levels of p16Ink4a, IL1α and IL-6 were upregulated while Lamin-B1 was downregulated and X-gal positive cell ratio was increased in comparison to control group. However, in the group that were co-cultured with hMSC after HU treatment, levels of p16Ink4a, IL1α and IL-6 were downregulated while Lamin-B1 was upregulated and X-gal positive cell ratio was decreased in comparison to senescent groupConclusion: It can be stated with these findings that mesenchymal stem cells caused decrease of senescence markers on endometrial senescence model. Moreover, they suppressed senescence associated secretory phenotype and showed anti-inflammatory effects. With further studies, new cellular therapies might be developed for the implantation problems which generally is the result of uterine senescence.Keywords: Endometrium, Senescence, Stem Cell