Türkiye`den elde edilen kutanöz leishmaniasis etkeni izolatların sıvı besiyerlerindeki üremelerinin karşılaştırılması

Abstract

Proje Adı: Türkiye'den Elde Edilen Kutanöz Leishmaniasis Etkeni Izolatların Sıvı Besiyerlerindeki Üremelerinin KarşılaştırılmasıÖğrenci Adı: Yalçın DEMİRDanışmanı: Prof. Dr. Ahmet ÖZBİLGİNAna Bilim Dalı: Tıbbi Parazitoloji A.DAmaç: Moleküler çalışmalarda, izoenzim analizlerinde ve ilaç çalışmalarında kullanılabilecek olan leishmania promastigotlarını en kısa sürede en fazla üreten sıvı besiyerini saptamaktır.Gereç ve yöntem: Sıvı azot tankında saklanan, Türkiye'deki KL hastasından elde edilmiş Leishmania izolatları çıkarılıp canlandırılmış ve NNN besiyerine ekimleri yapılmıştır. Üretilen izolatların Real-Time PCR yardımıyla ITS1 bölgesine özgü primer ve problarla genotiplendirilmiştir. Türkiye'deki KL hastalarından elde edilen ve genotiplendirme sonucu L. tropica, L. major ve L. infantum/donovani olarak tür tayinleri saptanan izolatlardan birer tanesi çalışmaya alınmış ve RPMI-1640, M199, Schneiders, Nutrient Broth, Brain Heart Broth besiyerlerine ekimleri yapılmıştır ve besiyerleri her gün 12. güne kadar kontrolleri yapılarak, Thoma lamı yardımıyla üreme yoğunlukları hesaplanmıştır.Bulgular ve sonuçlar: Türkiye'deki KL hastalarından elde edilmiş ve tür tayini yapılmış L. tropica, L. major ve L. infantum/donovani izolatlarının 8. günden itibaren RPMI-1640 besiyerinde çalışmada kullanılan diğer besiyerleri olan M199, Schneiders, Nutrient Broth, Brain Heart Broth besiyerlerine göre tüm türlerin promastigotlarını daha fazla sayıda üretebildiği görülmüştür (p<0.05). Bu nedenle Türkiyeden izole edilen KL etkeni Leishmania türlerine gereksinim olduğu durumlarda en iyi sıvı besiyerinin RPMI-1640 olduğu saptanmıştır. Diğerleri sırayla M199, Schneiders, Brain Heart Broth ve Nutrient Broth besiyerlerinin tercih edilmesinin uygun olacağı bildirilmiştir.Anahtar Sözcükler: Leishmania ,Besiyeri, Türkiye ,Kültür

Project Title: The Comparison Of Reproductions Of Isolates, Obtained In Turkey, With Cutaneous Leishmaniasis In Liquid Culture MediaStudent Name: Yalçın DEMİRAdvisor: Prof. Ahmet ÖZBİLGİNMaster of Science: Medical Parasitology M.SObjective: Ascertain the liquid culture medium reproducing Leishmania promastigotes, to be used in molecular studies, isoenzyme analyses and drug studies, at most and within the shortest time.Materials and Methods: Obtained from the patients with cutaneous leishmaniasis in Turkey, Leishmania isolates stored in liquid nitrogen were vitalized in an appropriate occasion and inoculated into NNN culture medium. The isolates reproduced in the culture medium were genotyped via the method of Real-Time PCR with primers and probes specific to ITS1 sequence. The isolates, obtained from the patients with cutaneous leishmaniasis in Turkey and determined as L. tropica, L. major and L. infantum. /donovani after genotyping, were inoculated into RPMI-1640, M199, Schneiders, Nutrient Broth and Brain Heart (infusion) Broth culture media. Inoculated culture media were controlled on every day up to 12th day after inoculation and reproduction density of those was assessed in Thoma slide. Results and conclusion: It is observed that L. tropica, L. major and L. infantum/donovani isolates, obtained from the patients with cutaneous leishmaniasis in Turkey, can be reproduced in RPMI-1640 culture medium better than M199, Schneiders, Nutrient Broth, Brain Heart Broth culture media, used in the study, with much more promastigote reproduction for all Leishmania spp. beginning from 8th day (p<0.05). Therefore, it was ascertained that the best liquid culture medium is RPMI-1640 if promastigote reproduction of Leishmania spp., causing CL, obtained from Turkey is needed at most. Later on, it was concluded that M199, Schneiders, Brain Heart Broth and Nutrient Broth mediums would be suitable.Key Words: Leishmania, Culture media, Turkey, Culture.