Deneysel ohss modelinde kisspeptin-54 uygulamasının granüloza hücrelerindeki vegf ve PEDF seviyelerine etkisi

Abstract

Amaç: OHSS modeli oluşturulmuş sıçanlarda, Kisspeptin-54'ün, ovaryum morfolojisine ve VEGF, PEDF, PKA ve PKC seviyelerine etkisinin araştırılması amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem: İmmatür dişi Sprague-dawley sıçanları (n=30, 25 günlük, 30-40gr) rastgele 5 gruba (kontrol, sham, OHSS modeli, kısa süreli kisspeptin-54 uygulanmış OHSS modeli ve uzun süreli kisspeptin-54 uygulanmış OHSS modeli) ayrıldı. Serum LH ve FSH seviyeleri ELISA ile belirlendi. Sağ ovaryumlardan oositler ve granüloza hücreleri izole edilerek VEGF, PEDF, PKA, PKC için qRT-PCR analizi yapıldı. Oositler alfa-tübülin için immünofloresan yöntem ile boyandı. Sol ovaryum dokuları morfolojik olarak ve VEGF, PEDF, PKA, PKC için immünohistokimyasal yöntemler ile değerlendirildi.Bulgular: OHSS grubunda, fallop tüplerinde dilatasyon, ovaryumlarda anormal ağırlık ve hacim artışı gözlendi. Kısa ve uzun süreli Kisspeptin-54 uygulanan gruplarda etkilerin azaldığı belirlendi. OHSS grubunda, gelişmekte olan foliküllerin ve korpus luteumların azaldığı, kistik ve atretik foliküllerin arttığı gözlenirken, Kisspeptin-54 uygulanan gruplarda, gelişen folikül sayılarının ve korpus luteumun arttığı, atretik ve kistik foliküllerin azaldığı saptandı. OHSS grubundaki granüloza hücrelerinde VEGF, PKA, PKC seviyeleri mRNA ve protein düzeyinde artış gösterirken, PEDF seviyelerinin düştüğü belirlendi. Kisspeptin-54 uygulanan gruplarda bu etkilerin iyileştiği bulundu. Oositlerin tüm gruplarda immatür olduğu, olgun oositlerin kesimden önce ovulasyona uğradığı gözlendi. Uzun tedavi protokolünün kısa tedavi protokolünden daha etkili olduğu belirlendi.Sonuçlar: Kisspeptin-54'ün OHSS bulgularını azaltan etkilere sahip olduğu belirlendi. Kisspeptin-54'ün OHSS riskli kadınlarda oosit matürasyonunu tetikleyebilen bir aracı olduğu düşünülmektedir.

Aim: The aim of this study is to investigate the effect of Kisspeptin-54 on ovarian morphology and VEGF, PEDF, PKA and PKC levels in OHSS rat model.Material and method: Immature female Sprague-dawley rats (n=30, 25 days old, 30-40gr) were randomly divided into 5 groups (control, sham, OHSS model, short-term kisspeptin-54 administrated OHSS model and long-term kisspeptin-54 administrated OHSS model). Serum LH and FSH levels were determined by ELISA. qRT-PCR analysis was performed for VEGF, PEDF, PKA, PKC in isolated oocytes and granulosa cells from right ovaries. Oocytes were stained with an immunofluorescence method for alpha-tubulin. Left ovarian tissues were evaluated morphologically and by immunohistochemical methods for VEGF, PEDF, PKA, PKC. Results: In OHSS group, dilatation in fallopian tubes, abnormal increase in weight and volume in ovaries were observed. It was determined that effects decreased in short- and long-term Kisspeptin-54 administrated groups.It was observed that while developing follicles and corpus luteums decreased, cystic and atretic follicles increased in OHSS group, developing follicle and corpus luteum increased and atretic and cystic follicles decreased in Kisspeptin-54 administrated groups. It was found that VEGF, PKA, PKC levels increased in mRNA and protein levels, while PEDF levels decreased in granulosa cells in OHSS group. It was indicated that these effects improved in Kisspeptin-54 groups. It was observed that oocytes were immature in all groups and mature oocytes were ovulated before sacrification. It was determined that long-term Kisspeptin-54 administrated group was more effective than short-term administration.Conclusions: It was determined that Kisspeptin-54 had reducing of OHSS symtoms. Kisspeptin-54 is thought to be an agent that can be trigger oocyte maturation in women at risk of OHSS.