Resveratrolün sıçan hipokampus sinaptik plastisitesi üzerindeki etkilerinin immunohistokimyasal ve stereolojik yöntemlerle değerlendirilmesi

Abstract

Çalışmamıza Van Yüzüncü Yıl Üniversitesi Tıp Fakültesi Hayvan Deneyleri Yerel Etik Kurulu'nun onayı alındıktan sonra başlandı. Bu amaç için nöroprotektif madde olan resveratrol'un sinaps ve nöron sayısal yoğunluğuna ait etkileri stereolojik ve immunohistokimyasal olarak incelendi. Van Yüzüncü Yıl Üniversitesi Deneysel Tıp Uygulama ve Araştırma Merkezinde yapılan çalışmada Wistar-Albino türü, her grupta altı adet olmak üzere iki grupta on iki erkek sıçan kullanıldı. Birinci gruba günde bir kez serum fizyolojik içinde çözünen resveratrol (20mg/kg/gün) oral yolla gavaj ile verildi, ikinci grup ise kontrol grubu olarak tek başına SF gavaj ile verildi. Bir haftanın sonunda sıçanlar anestezi altında kafatasları açılarak çıkarılan beyin dokular %30'lik sükroz solusyonu içerisinde bir gün boyunca ve %20'luk sükroz içerisinde dokular dibe çökene kadar beklendi. Ardından dokular kriyomatriks içerisine gömülerek çalısma ısısı -20 0C ayarlanmış frozende ortalama 4µm kalınlıkta ardışık kesitleri lamlara alındı. Sıçanlardan her 400 µm aralıkta sistematik rastgele örnekleme ile iki seri ve her biri ortalama beş çift kesit içeren preparatlar hazırlandı. Hematoksilen eozin ile boyama işlemi yapıldı. Disektör sayım işlemine uygun tarafsız sayım çerçevesi kullanıldı. Fiziksel disektor yöntemi ile nöron sayımında sayısal yoğunluk hesaplandı. İmmunohistokimyasal olarak sinaptofizin ile sinaps işaretleyici kullanıldı. Preparatlar fotoğraflandı ve şık mikroskopik olarak değerlendirildi. Gruplar arası karşılaştırılmalarında istatistik programı olarak Mann-Whitney U testi kullanıldı. Sinaptofizin immunohistokimyasal reaksiyon kontrol grubuna göre göreceli olarak koyu boyandığı gözlendi. Granüler nöron sayısı bakımından gruplararası istatistiksel bir fark gözlenmedi (P>0.05). Elde edilen sonuçlar literatür ışığında tartışıldı.

This study was started after the approval of the Van Ethics Committee of Animal Experiments of the Faculty of Medicine of Van Yuzuncu Yıl University. For this purpose, the effects of resveratrol, which is a neuroprotective agent, on the synapse and neuron density were examined immunuhistochemically and stereologically. In the study conducted in Van Yüzüncü Yıl University Experimental Medicine Application and Research Center, twelve male rats were used in two groups; mean Wistar-Albino species six in each group. Resveratrol (20mg/kg/day) dissolved in saline was given orally by gavage to the first group and SF gavage alone as the control group. At the end of the week, rats were removed under anesthesia for one day in a thirty persent sucrose solution and a twenty persent sucrose was removed until the tissues settled to the bottom. Subsequently, the tissues were embedded in cryomatrix and consecutive sections of 4µm thickness were placed on the slides in the cryostate whose working temperature was adjusted to -20 0C. Rats were prepared in two series with systematic random sampling at each 400 µm interval and each containing an average of five sections. Stained with hematoksilen eosine. Unbias counting frame suitable for dissector counting was used. Numerical density was calculated in the neuron count by physical dissector method. Synaptophysin and synapse marker were used immunohistochemically. Preparations were evaluated by light microscopy. Mann-Whitney U test was used as the statistical program for comparison between the groups. The immunohistochemical reaction of the synaptophysis was observed to be relatively dark stained compared to the control group. No statistically significant difference was observed in the number of granular neurons intergroup (p<0,05). The results were discussed in the light of literature knowledge.