Afinite kromatografisi yöntemiyle koyun böbreğinden saflaştırılan anjiotensin konverting enzimi (ACE, E.C.3.4.15.1) aktivitesine NADH ve FAD bileşiklerinin in vitro etkilerinin araştırılması

Abstract

Anjiotensin konverting enzim (ACE EC 3.4.15.1), vazokonstriktör anjiotensin II'yi üreterek kan basıncının düzenlenmesinde merkezi bir rol oynar. Bu çalışmada ACE, koyun böbreğinden afinite kromatografisi yöntemi ile tek basamakta saflaştırıldı ve enzimin saflaştırma oranı 10305 kat ve spesifik aktivite 19075 EU/mg protein olarak hesaplandı. SDS-PAGE ile ACE'in 60 kDa ve 70 kDa molekül ağırlığında iki alt birime sahip olduğu belirlendi. Koyun böbreğinden saflaştırılan ACE aktivitesi üzerine NADH ve FAD bileşiklerinin etkisi araştırıldı. FAD bileşiği ACE aktivitesi üzerine hiçbir etki göstermedi. NADH bileşiği ise inhibisyon etkisi gösterdi. NADH bileşiği için % Aktiviteye karşı İnhibitör konsantrasyonu grafiği çizildi. Bu grafiğin denkleminden IC50 değeri 244.33 µM olarak hesaplandı. İnhibisyon çeşidi ve Ki değerini belirlemek için Lineveawer-Burk grafiği çizildi. İnhibisyon çeşidi yarışmasız inhibisyon ve Ki değeri 175.08 µM olarak belirlendi.

The angiotensin converting enzyme (ACE EC 3.4.15.1) plays a central role in regulating blood pressure by producing vasoconstrictor angiotensin II. In this study, ACE was purified from sheep kidney by affinity chromatography in one step and the purification rate of enzyme was 10305 fold and specific activity was calculated as 19075 EU/mg protein. The SDS-PAGE showed that ACE had two subunits with a molecular weight of 60 kDa and 70 kDa. The effect of NADH and FAD compounds on ACE activity purified from sheep kidney was investigated. The FAD compound showed no effect on ACE activity. NADH compound showed inhibition effect. For the NADH compound, % Activity against inhibitor concentration was plotted. The IC50 value of this graph was calculated as 244.33 µM. Lineveawer-Burk graph was used to determine the type of inhibition and Ki value. Inhibition type was determined as non-competitive inhibition and Ki value175.08 µM.