Siklosporin a ve timokinon`un etkinliğinin tavşan keratokonjunktivitis sikka modelinde karşılaştırılması

Abstract

Bu çalıĢmada, tavĢanda deneysel modelde oluĢturulan Keratokonjunktivitis Sikkasağaltımında, Siklosporin A ve Timokinon'un terapötik etkinliğinin karĢılaĢtırılmasıamaçlanmıĢtır. Ağustos 2017 - Aralık 2017 tarihleri arasında yaptığımız çalıĢmada, 20 diĢi,16 erkek toplamda 36 adet, 2-2,5 kg canlı ağırlıkta, yaklaĢık 3 aylık yaĢta, Yeni Zellandaırkı tavĢanda kuru göz modeli oluĢturulmuĢtur. Tedavi aĢamasında, her bir göz bir grupolarak kabul edilerek, toplamda 72 adet göz, sağ göz, Siklosporin A ve sol göz, Timokinongrubu olarak değerlendirilmiĢtir.TavĢanların, deneme öncesi klinik ve oftalmolojik muayenesinde; pupillar ıĢık yanıtı (PLR),palpebral, tehdit (menace) ve ıĢığa karĢı göz kısma (dazzle) refleksleri test edildi. GözyaĢımiktarını belirlemek amacı ile Schirmer I gözyaĢı testi ve korneal epitelyal hasar varlığıaçısından floresein boyama, Keratokonjunktivitis Sikka (KKS), oluĢum sürecinde denemeöncesi, 0, 3, 5, 7 ve 14. günlerde, tedavi aĢamasında 15, 18, 21, 28, 35, 38, 42, 46, 50, 54 ve60. günlerde yapıldı. Korneal neovaskularizasyon, korneal opasite, konjunktival hiperemi veĢemozis bulguları 0-3 arasında skorlandı. Elde edilen veriler ve görüntüler kaydedildi.Keratokonjunktivitis Sikka oluĢturmak için, 0-14. günler arasında tavĢanlara günde iki kez,% 0.1 BAK (Sigma, St Louis) 14 gün süreyle, 5µl topikal olarak uygulandı. 14. günsonunda, elde edilen veriler ıĢığında, Keratokonjunktivitis sikka oluĢumu sağlandığı tespitedildi. Sağ göz grubuna Restasis® % 0.05 (Allergan, Ġstanbul), sol göz grubuna Timokinon(Nigella sativa, Tabia) sabah 9.00, akĢam 16.00 olacak Ģekilde, tedavi aĢamasında 45 günboyunca günde iki kez, 1'er damla uygulandı. Belirtilen günlerde yapılan muayenelerdenelde edilen verilerin istatistiksel analizinde, p<0.05 anlamlı olarak kabul edildi, verilerortalama ± SH (Standart Hata) Ģeklinde kaydedildi, tablolar Ģeklinde sunuldu.ÇalıĢmanın 14. gününde, sağ gözlerde ortalama 4,25±1,25 mm/dk ve sol gözlerde ortalama4,47±1,4 mm/dk olarak gözyaĢı miktarı ölçüldü. Sağ gözlerde, ortalama 2,25±0,6, solgözlerde 2,0±0,67 hiperemi ve Ģemozis skoru tespit edildi. Korneal boyanma skoru, sağ gözgrubu için 3,58±0,5 ve sol göz grubu için 2,64±1,04, korneal opasite skoru sağ göz grubu xiviçin 2,22±0,63 sol göz grubu için 1,58±1,05 ve korneal neovaskularizasyon skoru sağ gözgrubu için 1,64±0,59 ve sol göz grubu için 1,31±0,85 olarak ölçüldü ve 0-14. gün aralığındaelde edilen bu veriler ile baĢlangıç değerleri (0. gün) kıyaslandığında kuru göz modelioluĢturulduğu ortaya kondu. Grup içi zamanlar arası karĢılaĢtırma yapıldığında, her ikigrupta da, hiperemi, Ģemozis, schirmer, korneal boyanma, korneal neovaskularizasyon,korneal opasite değerlerinin tümü için 0, 3, 5, 7 ve 14. günler arası fark anlamlı bulundu(p<0,001). Gruplar arası karĢılaĢtırma yapıldığında ise korneal boyanma da, 3, 5, 7 ve 14.günlerde (p<0,001), korneal opasitede 7. Günde (p˂0,05), 14. günde (p<0,01), kornealneovaskularizasyonda ise sadece 7. günde (p˂0,05) tespit edilen farklılıklar anlamlı kabuledildi.ÇalıĢmanın 60. günde Siklosporin grubunda ortalama 11,86±1,22 mm/dk gözyaĢı miktarı,0,06±0,23 hiperemi ve Ģemozis skoru, 1,33±0,47 korneal boyanma skoru, 0,39±0,59korneal opasite skoru, 0,28±0,51 korneal neovaskularizasyon skoru kaydedildi. Timokinongrubunda ortalama 12,03±1,0 mm/dk gözyaĢı miktarı, 0,14±0,35 hiperemi ve 0,0±0,0Ģemozis skoru, 0,67±0,47 korneal boyanma skoru, 0,33±0,53 korneal opasite skoru,0,39±0,49 korneal neovaskularizasyon skoru kaydedildi. Grup içi zamanlar arasıkarĢılaĢtırma yapıldığında, tüm günler arası fark anlamlı bulundu (p<0,001). Gruplar arasıkarĢılaĢtırma yapıldığında ise hiperemi değeri için sadece 28. gün (p˂0,01), Schirmer testdeğeri için 28, 35 ve 50. günlerde (p˂0,05), 54. günde (p˂0,01), korneal boyanma 15, 18,21, 28, 35, 38, 50 ve 54. günlerde (p˂0,001), korneal opasite ise 21. günde (p˂0,01), 15, 18,28, 35, 38. günlerde (p˂0,001) tespit edilen farklılıklar anlamlı kabul edildi.Sonuç olarak; KKS sadece gözyaĢının eksik salgılanması veya göz yüzeyinden fazlacabuharlaĢması olarak değil, gözyaĢı döngüsünü bir veya birden çok noktada etkileyen birinflamatuvar süreç olarak ele alınmaktadır. Hastalığın patogenezinde yangısal elemanlarolarak hücreler ve mediatörlerin varlığı ortaya konulmuĢtur. Bunlar, esas olarak lenfositler,dendritik hücreleri, langerhans hücreleri, makrofajlar ve T hücreleri (Th1, Th17) gibi antijensunan hücreler olarak bilinmektedir. Bugüne kadar yapılan çalıĢmalarda Siklosporin A'nınbu döngü üzerindeki etkinliğini ortaya koymak amacı ile çok sayıda çalıĢma yapılmıĢtır.Klinik bulgular açısından Timokinon kullanımı ile Siklosporin A'ya eĢdeğer kabuledilebilecek iyileĢme bulguları çalıĢmamızda saptanmakla birlikte inflamatuvar sitokinler,Th1 ve Th17-iliĢkili sitokinler, kemokinler ve reseptörleri, MMP'ler ve salgılananfosfolipazlara etkinliği üzerinde in vivo ve invitro olarak olası etkilerini ortaya koyacak ileriaĢamalı çalıĢmalara gereksinim duyulmaktadır.Anahtar Kelimeler: Kuru Göz, TavĢan, Siklosporin A, Timokinon.

In this study, it was aimed to compare the therapeutic efficacy of Cyclosporin A andThymoquinone in Keratoconjunctivitis Sicca treatment in rabbit experimental model. Thestudy conducted between August 2017 -December 2017 and dry eye model occurred in 20female, 16 male, 2-2,5 kg weight, about 3 months old, in totally 36 New Zealand Rabbit. Instudy, 72 eyes, evaluated in two groups as; right eye, Cyclosporin A and left eye,Thymoquinone group.The rabbits were examined clinically and ophthalmologically before the experiment. InOphthalmologic examination; pupillary light response (PLR), palpebral, menace and dazzlereflexes were tested. For the purpose of determining the amount of tears, Schirmer - I teartest and fluorescein staining for corneal epithelial damage was performed on 0,3,5,7,14 .days in pre-treatment phase and 15, 18, 21, 28, 35, 38, 42, 46, 50, 54 ve 60 .days intreatment phase. Corneal neovascularization, corneal opacity, conjunctival hyperemia andschemozis were scored between 0-3. The obtained data and images were recorded.To form Keratoconjunctivitis Sicca, between 0-14. days, administered 5µl topically torabbits twice a day 0.1% BAK (Sigma, St Louis) during 14 days. On 14. day, it wasdetermined that Keratoconjunctivitis Sicca formation occurred in the obtained data by tests.To right eye group, Restasis® 0.05% (Allergan, Istanbul), to left eye group Timokinon(Nigella sativa, Tabia) was applied one drop every day, at 9:00 am and 16:00 pm dailyduring 45 days in treatment phase. In the statistical analysis of the data obtained from theexaminations performed on the indicated days, p<0.05 was considered significant, the meanvalues were recorded as mean ± SE (Standard Error) and presented in tables.On 14. day, the mean amount of tear was measured as 4,25 ± 1,25 mm/min in the right eyeand 4,47 ± 1,4 mm / min in the left eye. In the right eye group, 2,25 ± 0,6, and in the left eyegroup, 2,0 ± 0,67 score were determined for hyperemia and a schemozis. The cornealstaining score was 3.58 ± 0.5 for the right eye group and 2.64 ± 1.04 for the left eye group,2.22 ± 0.63 for the right eye group, and 1.58 ± 0.50 for the left eye group 1.05 and corneal xvineovascularization score were measured as 1.64 ± 0.59 for the right eye group and 1.31 ±0.85 for the left eye group and by comparing 14. day data and initial values (day 0), it wasfound that dry eye model was occured. There was a significant difference between 0, 3, 5, 7and 14 days (p<0,001) for hyperemia, schemozis, schirmer, corneal staining, cornealneovascularization and corneal opacity values inter both groups for days. In two groupscomparement, observed corneal staining on days 3, 5, 7 and 14 (p<0,001), corneal opacityon 7. day (p˂0,05), on 14. day (p<0,01), corneal neovascularization only differences on 7.day (p˂0.05) it was considered significant.On the 60. day of the study, the mean value amount of tears in the Cyclosporin group was11,86±1,22 mm / min, 0,06±0,23 hyperemia and schemozis score, 1,33±0,47 cornealstaining score, 0,39±0.59 corneal opacity score, and 0.28±0.51 corneal neovascularizationscore were recorded. The mean value amount of tears in the Thymoquinone group was12,03±1,0 mm / min, 0,14±0,35 hyperemia and 0,0±0,0 schemozis score, 0,37±0,47 cornealstaining score, 0,33±0.53 corneal opacity score, 0,39±0,49 corneal neovascularization scorewere recorded. When the inter-group time comparison was performed, the differencebetween all days was significant (p<0.001). In the comparison between the groups, only on28. day (p˂0,01) for hyperemia score, on 28, 35 and 50. day (p˂0,05) for Schirmer testvalue, on 54. day (p˂0,01) corneal staining score on 15, 18, 21, 28, 35, 38, 50 and 54. days(p˂0,001) and corneal opacity score on 21. day (p˂0,01), on 15,18,28,35,38.days (p˂0,001)the differences were considered significant.As a result; Keratoconjunktivitis Sicca (KCS) is evaluated as an inflammatory process thataffects the tear cycle at one or more points, not only an incomplete secretion of tears orexcessive evaporation from the ocular surface. In the pathogenesis of the disease, theexistence of cells and mediators as inflammatory elements has been revealed. Cells aremainly known as antigen presenting cells such as lymphocytes, dendritic cells, langerhanscells, macrophages and T cells (Th1, Th17). A number of studies have been conducted withthe aim of demonstrating the efficacy of Cyclosporin A on this cycle in studies conducted todate. In terms of clinical manifestations, the use of thymoquinone has been shown to beequivalent to Cyclosporin A, but it has been shown to be effective in vivo and in vitro oninflammatory cytokines, Th1 and Th17-related cytokines, chemokines and receptors, MMPsand secreted phospholipases studies are needed.Keywords: Dry Eye, Rabbit, Cyclosporine A, Thymoquinone