Ratlarda yangı şiddetinin bazı akut faz proteinleri ve gen ekspresyonlarına etkisi

Abstract

Balıklardan memelilere tüm canlılarda mikroorganizmalar, fiziksel, kimyasal ve enfeksiyon etkenleri, tümör faktörleri ve immunolojik nedenler gibi çeşitli faktörlere bağlı olarak inflamasyon şekillenir. Bu sürecin bir parçası olan ve başlıca karaciğerden sentezlenen akut faz proteinleri (AFP), inflamasyona karşı savunma mekanizmasının bir parçasıdır. Aynı zamanda klinik olarak tanı amaçlı kullanılmaktadır.Bu çalışmada deneysel yangı oluşturulan ratlardaki AFP düzeyleri ile bunların karaciğerdeki gen ekspresyonlarını birlikte değerlendirmek ve doza bağlı kan ve ekspresyon düzeylerinin etkilenip etkilenmediğinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Araştırmamızda 12-14 haftalık, ortalama 220-300 g ağırlığında 147 adet Wistar albino dişi rat kullanılmıştır. Ratlarda farklı şiddette akut yangı oluşturmak için hayvanlara Freund's Complate Adjuvant (FCA, Sigma-Aldrich Chemical Co LTD, Poole, UK) uygulaması yapılmıştır. Ratlar rastgele olarak 5 gruba bölünerek her bir gruba (Kontrol grubu n=7 ve deneme grupları n=35 hayvan) sırasıyla 0, 1.25, 2.5, 5 ve 10 ml/kg dozlarında FCA (Mycobacterium tuberculosis- 1μg/ml) intraperitonal olarak enjekte edilmiştir. FCA uygulanan dört grubun (grup 2, 3, 4, 5) herbirinden 6, 12, 24, 48 ve 96. saatlerde rastgele seçilen yedişer rattan kan ve doku örnekleri uygun şekilde toplanarak saklanmıştır. Elde edilen serum örneklerinden C-reaktif protein (CRP), Serum Amiloid A (SAA) ve Haptoglobin (Hp) ELISA yöntemi ile analiz edilmiştir. Doku örneklerinden sırasıyla mRNA ve cDNA sentezleri yapılmış ve real time PCR'da uygun primerler kullanılarak CRP, SAA, Hp ve GAPDH genlerine ait ekspresyon düzeyleri belirlenmiştir. Serum protein fraksiyonları elektroforetik olarak gösterilmiş ve sonuçlar istatistiki olarak değerlendirilmiştir

From fish to mammals, inflammation is shaped by various factors such as microorganisms, physical, chemical and infectious agents, tumor factors and immunological causes. Acute phase proteins (APPs), which are part of this process and are synthesized mainly from the liver, are part of the defense mechanism against inflammation. It is also used clinically for diagnostic purposes.The aim of this study was to evaluate the APP levels in rats with experimental inflammation and their gene expression in the liver and to determine whether their dose and blood and expression levels were affected. In our study, 147 Wistar albino female rats weighing 220-300 g, 12-14 weeks old, were used. Freund's Complete Adjuvant (FCA, Sigma-Aldrich Chemical Co. LTD, Poole, UK) was applied to animals to generate acute inflammation of different severity in rats.Rats were randomly divided into 5 groups and each group (control group n = 7 and experimental groups n = 35 animals) were injected intraperitoneally with FCA (Mycobacterium tuberculosis-1μg / ml) at 0, 1.25, 2.5, 5 and 10 ml / kg, respectively. Blood and tissue samples were collected from each of four FCA groups (group 2, 3, 4, 5) from randomly selected 7 randomly selected rats at 6, 12, 24, 48 and 96 hours. CRP, SAA and Haptoglobin were analyzed by ELISA method. mRNA and cDNA syntheses were made from tissue samples respectively and expression levels of CRP, SAA, Hp and Gapdh genes were determined by using appropriate primers in real-time PCR. Serum protein fractions are shown electrophoretic and results are evaluated statistically.