Sıcak güta perka tekniklerinin sementoblastlar ve periodontal ligament hücreleri üzerine etkisinin incelenmesi

Abstract

Bu çalışmanın amacı, sıcak güta perka dolum tekniklerinden `Devamlı Isı ile ObturasyonTekniği` ve `Termoplastik Güta perka Enjeksiyonu` uygulanması sırasında diş köklerinin apeksindeoluşan yüksek ısının insan periodontal ligament mezenkimal hücreleri (iPDL-MKH) ve faresementoblast (OCCM.30) hücreleri üzerine olası etkisini incelemektir.Yetmiş adet tek ve düz kanallı insan premolar dişlerinin apekslerinden 1mm elmassepare yardımı ile uzaklaştırıldıktan sonra hücre kültür ortamına adapte edildi. Hücre canlılıkdeneyleri için kullanılacak olan 50 diş, 10 mm olacak şekilde; mRNA ekspresyon deneylerindekullanılacak olan 20 diş, 14 mm olacak şekilde kronlarından kesildikten sonra çalışma boyundaProTaper Next X5 eğesine kadar her eğe arasında 2ml NaOCl solüsyonu ile irrigasyon yapılarakgenişletildi. Hücre kültürü ortamı için steril hale getirilen dişler rasgele 6 farklı gruba ayrıldı: dişsizkontrol 1 (K1); sadece diş kontrol 2 (K2) ; sadece AH Plus kanal patı (KP); tek kon (TK); devamlı ısıile obturasyon tekniği (DIOT); termoplastik güta perka enjeksiyonu (TGE). Deney düzeneğineyerleştirilen örneklerin iPDL-MKH ve OCCM.30 hücrelerinin canlılığına etkisi MTT hücre canlılıkdeneyleri ile analiz edildi. Ayrıca HSP-27, HSP-70, HSP-90 heat-shock proteinleri ile mineralizedoku belirteçleri Bone sialoprotein (BSP), osteokalsın (OCN), runt-related transcription factor-2(Runx2), tip I kolajen (COL I), alkalen fosfataz (ALP) mRNA ekspresyon düzeyleri Real timepolymerase chain reaction (RT-PCR) ile değerlendirildi.Çalışma sonuçları kontrol grupları hariç tüm gruplarda iPDL-MKH ve OCCM.30hücrelerinin canlılığının etkilendiğini gösterdi. Tek kon tekniği ile DIOT ve TGE grupları ayrıcakarşılaştırıldığında, ısının anlamlı derecede hücre canlılığına negatif etkisi olduğu gözlendi (p<0.05).Kontrol 1 grupları hariç tüm gruplarda BSP, OCN, Runx2, COL 1, ALP mineralize doku belirteçlerive HSP27, HSP70, HSP90 gibi heat-shock proteinlerinin mRNA ekspresyon düzeyleri etkilendiancak bu olumsuz etki ısı uygulanan gruplarda daha fazla gözlendi (p<0.05).Bu çalışma sıcak güta perka dolum tekniklerinin iPDL-MKH, OCCM.30 hücreleri üzerineetkisini inceleyen ilk ve tek çalışmadır. Bu çalışmanın limitasyonları dahilinde, ısının hücrecanlılığına ve mineralizasyon belirteçlerinin mRNA ekspresyonlarına olumsuz etkileri olduğusonucuna varılmıştır. Bu konuda farklı deney modellerinde daha çok çalışma yapılması gereklidir.

The aim of this study was to determine the effect of heat released during the continuous waveof condensation techniques (CWCT) and thermoplastic gutta percha injection techniques (TGE) onthe human periodontal ligament mesenchymal cells (iPDL-MSC) and mouse cementoblast(OCCM.30).Seventy human premolar teeth with single and straight canals were adapted to the cell culturemedium after removal of 1 mm from the apex using a diamond saw. The crowns were removed and10 mm long fifty teeth were used for cell viability experiments and 14 mm long 20 teeth were used inthe mRNA expression experiments. The root canals were prepared up to the ProTaper Next X5 file.Two ml NaOCl solution was used between each file. Teeth were sterilized first for the cell culturemedium and then randomly divided into 6 different test groups: control 1 (no root, K1); control 2(with roots K2); AH Plus group (KP); single cone technique (TK); continuous wave of condensationtechnique (DIOT); thermoplastic gutta-percha injection technique (TGE). The viability of the iPDLMSC and OCCM.30 cells was analyzed by MTT cell viability experiments. Furthermore, HSP-27,HSP-70, HSP-90 heat shock proteins and mineralized tissue markers bone sialoprotein (BSP),osteocalcin (OCN), runt-related transcription factor-2 (Runx2), type I collagen (COL I), alkalinephosphatase (ALP) mRNA expression levels were evaluated by Real time polymerase chain reaction(RT-PCR).The results of the study showed that the viability of iPDL-MSC and OCCM.30 cells wereaffected in all groups except the control groups. When single cone technique and DIOT and TGEgroups were compared, it was observed that heat had a significant negative effect on cell viability (p<0.05). In all groups except control group 1, BSP, OCN, Runx2, COL 1, ALP mineralized tissuemarkers and mRNA expression levels of heat-shock proteins such as HSP27, HSP70, HSP90 wereaffected, but this negative effect was higher in the heat treated groups (p <0.05).This is the first and only study to investigate the effect of heated gutta-percha fillingtechniques on iPDL-MSC OCCM.30. Within the limitations of this study, it was concluded that heathas negative effects on cell viability and mRNA expression of mineralization markers. Further studiesare needed in different experimental models.