Taşıyıcısız proteaz enzimi immobilizasyonda enzim ikincil yapılarındaki değişimlerin incelenmesi

Abstract

Bu çalışmada, çapraz bağlı proteaz agregatları biçiminde taşıyıcısız immobilize enzim sistemlerinin katalitik aktivitsine immobilizasyon ortam bileşimlerinin (başlangıç enzim derişimi, presipitasyon ajanı derişimi, çapraz bağlayıcı bifonksiyonel ajan derişimi, proteik feeder ajan türü ve derişimi) etkisi araştırılmıştır. Bunun yanı sıra, geliştirilen biyokatalizörün değişik çözücü sistemlerindeki katalitik performanslarıda araştırılmıştır. Enzim ikincil yapısındaki değişimler, Fourier transform infrared spektroskopinden elde edilen spekrumların moleküler düzeyde analizi ile gerçekleştirilmiştir. Gürültü/sinyal oranının minimizasyonu için 256 eş-tarama sayısı ile gerçekleştirilen analizlerdeki tarama hızı 0.2 cm/s ve çözünürlük değeri 4 cm-1 olarak ayarlanmış ve elde edilen spektrumların karakterizasyonunun değerlendirilmesi bir bilgisayar yazılım programı olan PeakFit aracılığıyla gerçekleştirilmiştir. İmmobilize enzim sisteminin katalitik performansındaki değişimler, moleküler düzeyde düzenli ya da düzensiz α-heliks ve β-sheet yapılarının yüzde alan değişimleri ile karşılaştırılmıştır.

In this study, the effect of immobilization media compositions (initial enzyme concentration, precipitating agent concentration,cross-linker bifunctional agent concentration and protein feeder agent types and concentrations) on the catalytic activity of the cross-linked protease aggregates which are a carrier-free immobilized enzyme system was investigated. In addition, the catalytic performance of the developed biocatalysts in different solvent systems was also nvestigated. The changes in the secondary structure of the enzyme were performed by molecular analysis of the spectra obtained from Fourier transform infrared spectroscopy. The analysis conditions for minimization of noise/signal ratio were performed with the scanning number of 256 at the scan rate of 0.2 cm/s and the resolution of 4 cm-1, and the evaluation of the characterization of the obtained spectra was carried using the Peakfit software program. The changes in the catalytic performance of the immobilized enzyme system were compared with the percent field changes of the regular or irregular α-helix and β-sheet structures at the molecular level.