Şelataz saflaştırılması ve uygulamaları

Abstract

Yapılan bu çalışmanın amacı, klorofil sentezinin ilk basamağı olan Magnezyum protoporfirini, protoporfirin IX ve Mg+2 varlığında ve magnezyum şelataz enzimi katalizliğinde laboratuvar koşulları çerçevesinde sentezlemektir. Bu doğrultuda yeşil bitki yapraklarından magnezyum şelataz enzimi izole edilerek saflaştırılmıştır. Magzeyum şelataz enzimini saflaştırmak için boya afinite kromatografi tekniği ve sibakron mavisi boya olarak kullanıştır. Sentezlenen boya afinite kolonunun karakterizasyonu, kızılötesi spektroskopi (IR), şişme testi ve taramalı elektron mikroskobu (SEM) görüntüsü gibi parametreler kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Saflaştırılan magnezyum şelataz enzimi ve magnezyum içeren protein karışımı, Magnezyum protoporfirin sentezi için destek materyal olarak, ANADOLUCA metodu ile Poli (HEMA-ko-Magzenyum-şelataz) kolonuna immobilize edilmiştir. Sentezlenen kriyojel kolonların karakterizasyonu için şişme testleri yapılmış ve IR ve SEM görüntüleri alınmıştır. Protoporfirin IX ve Mg+2 iyonunu içeren çözeltisinin kolondan geçirilmesiyle sentezlenen Magnezyum protoporfirin fluorimetrik yöntemle belirlenmiştir.

The purpose of this study is to synthesize Protoporphyrin IX, Mg2+ in the laboratory conditions of the resultant Magnesium Porphyrin which is the first step of chlorophyll synthesis in the catalysis of magnesium chelatase enzyme. Accordingly, enzymes of magnesium chelatase have been extracted from the green plant leaves and purification procedures have been applied. Dye affinity chromatography has been used to purify the magnesium chelatase enzyme and cibacron blue has used as a dye. The characterization of the synthesized dye affinity column has performed by using parameters such as infrared spectroscopy (IR), swelling tests and scanning electron microscopy (SEM) images. Subsequently, a protein mixture containing poly (HEMA-co-magnesium chelatase) column and magnesium chelatase enzyme according to the Aminoacid (monomer) Decorated and Light Underpinning Conjugation Approach (ANADOLUCA) method has immobilized to provide support material for Magnesium Porphyrin synthesis. Swelling tests have performed for the characterization of the synthesized column material, IR and SEM images have been taken. Magnesium Porphyrin synthesized by passing Protoporphyrin IX and Mg2+ solution through the column has been determined by the fluorimetric method.