Sıçan mezenterik arterinde Rho-kinaz enzim ekspresyonu ve damar yatağı perfüzyon basıncının kontrolüne Rho/Rho-kinaz yolağının katkısı

Abstract

ÖZET Sıçan Mezenterik Arterinde Rho-kinaz Enzim Ekspresyonu ve Damar Yatağı Perfüzyon Basıncının Kontrolünde Rho/Rho-kinaz Yoiağmın Katkısı Rho-kinaz enziminin sıçan mezenterik arterindeki ekspresyonu ve onun inhibiîörleri olan Y-27632 ve fasudilin, a adrenerjik reseptör agonisti olan fenilefrin ile ETa, ve ETr reseptör agonisti olan endotelin-1 (ET-1) ile arttırılmış perfüzyon basıncı üzerindeki etkileri araştırıldı. Servikal dislokasyonla öldürülen sıçanların karınları süratle açıldı, superior mezenterik arteri hızla kanüle edilip izole edildikten sonra sıcaklığı 37 `C'de sabit tutulmuş bir hazne içine yerleştirildi ve bir perfüzyon pompası aracılığıyla sabit hızda (5-5.5 ml/dk) perfüze edildi. Damar yatağı perfüzyon basıncı fenilefrinle veya ET-1 ile artırıldı. ET-1, fenilefrine göre daha düşük konsantrasyonlarda vazokonstriksiyon oluşturdu. Y-27632 ve fasudil, perfüzyon basıncında konsantrasyon bağımlı bir azalma meydana getirdi. Eenilefrinle arttırılan perfüzyon basıncı üzerinde bu inhibitor ajanlar daha belirgin bir vazodilatasyon oluşturdular. Eenilefrinle kastırılmış mezenterik damar yatağı 10`' M konsantrasyonda Y-27632 ile % 85.8±3.7 oranında gevşerken, ET-1 ile perfüzyon basıncı arttırılmış damar yataklarında 10 M konsantrasyonda Y-27632 ile % 48.H5.4 oranında vazodilatasyon meydana geldi (/><0.001). Vasküler endotelyumu uzaklaştırmak için mezenterik damar yatağı saponin (100 mg/1, 10 dk boyunca) ile perfüze edildi ve endotelyuma bağımlı asetilkolin gevşemeleri önemli ölçüde azaldı. Buna karşılık endotelyumu uzaklaştırılmış damarlarda Y-27632 ile oluşturulan gevşeme, endotclyum varken elde edilen gevşemeden farklı değildi. Western blot deneyleri, yaklaşık 1 60 kDa ağırlığında olan Rho-kinazm sıçan mezenterik arterinde eksprese edildiğini göstermiştir. Bu sonuçlar sıçan mezenterik arterinde Rho-kinaz enziminin eksprese edildiğini ve vasküler direncin kontrolüne katkı sağladığını gösterir. Dahası, endotelyumun uzaklaştırılması Y-27632 ile oluşan vazodilatasyon üzerinde belirgin bir etki göstermemiştir. Ayrıca. ET-1 ile indüklenen vazokonstriksiyonun Rho-kinaz, inhibitörlerine olan duyarlığı fenilefrine oranla daha azdı ve bu durum olasılıkla cndotclin-1 reseptörleri (ETa ve ETb) ve a-adrenerjik reseptörlerin bu sinyal transdüksiyon yolağı ile farklı düzeylerde ilişkili olabileceğini önerebilir.

ABSTRACT Expression of Rho-kinasc and Its Contribution to the Control of Perfusion Pressure in the Isolated Perfused Rat Mesenteric Vascular Bed Rho-kinase expression was investigated in the rat mesenteric artery and effects of its inhibitors, (+)-(R)-trans-4-(l-aminoethyl)-N-(4-pyridyi) cyclohexanecarboxamide dihydrochloride monohydrate (Y-27632), fasudil (HA-1077) were examined on the perfusion pressure which was elevated by two different receptor agonists, namely a- agonist, phenylephrine and, ETa and KTB receptor agonist, endothelin-1. Y-27632 and fasudil produced concentration dependent decrease in perfusion pressure. There was no difference between concentration-response lines of these two inhibitors. Maximum decrease in the perfusion pressure induced by 10` M Y-27632 was 85.8±3.7 % when the tone was increased by phenylephrine. However it was 48.1±5.4 % (/><0.001) following the perfusion pressure was elevated by endothelin-1. Saponin perfusion (100 mg/1, for 10 min), which abolished acetylcholine-induced relaxation, did not significantly modify Y-27632-elicited relaxation. Western blot analysis revealed that rat mesenteric artery expresses Rho-kinase protein with the molecular weight of approximately 160 kDa. These results show that Rho-kinase enzyme is expressed in rat mesenteric artery and it contributes to the control of vascular resistance. Moreover, endothelium removal had no marked effect on the vasodilatation induced by Y-27632. In addition. endothelin-1 induced vasoconstriction was more resistant to the Rho-kinase inhibitors than that by phenylephrine, probably since endothelin-1 receptors may be associated with this signal transduction pathway with different level compared to a-adrenergic receptors.