Sıçan koroner mikrovasküler endotel hücre kültüründe androjenik ve estrojenik hormonların rho-kinaz enzim ekspresyonu üzerine etkisi

Abstract

Bu çalışmada sıçan koroner mikrovasküler endotel hücrelerinde androjenik ve estrojenik hormonların RhoA ve ROCK-2 enzim ekspresyonu üzerine etkileri araştırıldı. Bu amaçla sıçan koroner mikrovasküler endotel hücreleri kültüre edildi.Kültüre edilen sıçan koroner mikrovasküler endotel hücrelerinde androjenik hormon olarak testosteron (10-8 M - 10-7 M), estrojenik hormon olarak 17-ß estradiol (10-8 M - 10-7 M) ve progesteron (10-8 M - 10-7 M) 24 saat uygulandı, ROCK-2 ve RhoA enzimlerinin ekspresyonları üzerine etkisi araştırıldı.Çalışmada Wistar türü sıçanlar kullanıldı. Kalpler Langendorff kalp perfüzyon sistemine asılarak koroner mikrovasküler endotel hücreleri elde edildi. Hücreler kültür flasklarına ekilerek 37ºC'de %5 CO2'li ortamda inkübe edildi. Konfluent olan flasklar pasajlanarak çoğaltıldı. 3. pasaj koroner mikrovasküler endotel hücreleri, deneylerden 24 saat önce bölünmeleri durdurulup testosteron, 17-ß estradiol, progesteron ile 24 saat inkübe edildi. İnkübasyon sonrası flasklardaki hücreler ise homojenize edilerek Western-Blot yöntemi ile RhoA protein ve ROCK-2 enzim ekspresyon düzeyleri ölçüldü.Sonuç olarak, 17ß-estradiol sıçan koroner mikrovasküler endotel hücrelesinde ROCK-2 ve RhoA enzimlerinin ekspresyonunu anlamlı bir şekilde artırırken, testosteron ve progesteron ROCK-2 ve RhoA enzimlerinin ekspresyonunu etkilemedi. Bu bulgu, 17ß-estradiol'un kardiyovasküler hastalık oluşumuna katkıda bulunabileceğini, testosteron ve progesteronun kardiyovasküler etkilerini Rho/Rho-kinaz sinyal yolağı üzerinden göstermediğine işaret edebilir.

In this study, we aimed to investigate the possible effect of androgenic and estrogenic hormones on the RhoA and Rho-kinase ekspressions in rat coronary microvascular endothelium cell culture. Therefore, we cultured rat coronary microvascular endothelial cells.The effect of testosterone (10-8 M - 10-7 M), 17-ß estradiol (10-8 M - 10-7 M) and progesterone (10-8 M - 10-7 M) hormones on the expression of ROCK-2 and RhoA protein was investigated.Wistar rats were used in the study. Coronary microvascular endothelial cells were obtained by the mounted rat hearts on a constant-flow Langendorff system. The cell suspensions were plated and incubated at 37 oC under 5 % CO2. The third passage coronary microvascular endothelial cells was made quiscent 24 hours before experimentation and than ıncubated with testosterone, 17-ß estradiol and progesterone. After the incubation, the cells were homogenized for measuring RhoA protein and ROCK-2 enzyme expression levels by Western-Blotting technique.As a result, 17-ß estradiol upregulated the RhoA and ROCK-2 protein expressions significantly but testosterone and progesterone did not change the levels of these proteins.This finding indicates that 17-ß estradiol may effect the cardiovascular system via Rho/Rho-kinase pathway however this pathway does not play a role on the testosterone and progesterone?s cardiovascular effects.