HBA1C ölçümünde HPLC, LC/ESI/MS ve immün assay yöntemlerinin karşılaştırılmaı

Abstract

Glikozile hemoglobinin majör formu olan HbA1c, IFCC tarafından HbA1'in beta zincirinin amino terminal ucunda bulunan valin amino asitinin amino grubuna glukoz bağlanması ile oluşan dayanıklı yapı [N-(1-deoksifruktozil) hemoglobin] olarak tanımlanmıştır. HbA1c; DM' de orta ve uzun dönem glisemik kontrolün izlenmesi ve DM hastalarında, diyabetik komplikasyonların gelişme riskinin değerlendirilmesinde sıklıkla kullanılmaktadır. Günümüzde çok sayıda glikozile Hb ölçüm yöntemi geliştirilmiştir. HPLC/ESI/MS ve HPLC/CE yöntemi, HbA1c ölçümünde IFCC tarafından referans metot olarak kabul edilmektedir. IFCC; referans HbA1c ölçüm yöntemi, hemoglobinin beta zincirinin Endoproteinaz Glu-C ile kesilmesi sonrası oluşan glikozile hekza peptidlerin, total hekzapeptidlere oranlanması temeline dayanmaktadır. HPLC-ESI-MS özellikle Hb'nin beta zincirinin N-terminal ucundaki glikozilasyonu ölçtüğü için HbA1c'nin tam ölçümünü sağlamaktadır. Biz bu çalışmada, laboratuarımızda kullanılan, HPLC ve İmmün assay metotlarını, IFCC tarafından referans metot olarak kabul edilen HPLC/ESI/MS metodu ile yöntem karşılaştırma çalışması yaptık. 27 sağlıklı ve 27 diyabetik bireyden; iki grup oluşturuldu. Her iki HPLC ve İmmün assay yönteminin HPLC/ESI/MS ile karşılaştırıldığında; hem sağlıklı(sırasıyla 0,8972, 0,8875) grupta, hem de diyabetik(sırasıyla 0,9243, 08588) grupta korelasyon vardır.HPLC, İmmün Assay ve LC/ESI/MS yöntemlerinin; gün içi ve günler arası tekrarlanabilirlikleri hem sağlıklı (sırasıyla gün içi -günler arası; 3.87, 4.4 / 3.93, 4.22/ 2.07, 2.3) grupta, hem de diyabetik(sırasıyla gün içi -günler arası 3.47, 3.9/ 3.34, 3.82 / 1.74, 1.9 ) grupta çalışıldı.Sonuç olarak; her iki yönteminde, HPLC/ESI/MS yöntemi ile uyumlu olduğu ancak; yapılan gün içi ve günler arası tekrarlanabilirlik çalışmalarında HPLC ve İmmün assay yöntemlerinin, HPLC/ESI/MS yöntemine göre yüksek %CV değerleri elde edildiği belirlendi.Anahtar kelimeler: HbA1c, HPLC/ESI/MS, HPLC, İmmün Assay

The major glycated hemoglobin HbA1c has been defined as stable form [N-(1-deoksifruktozil) formed by glycation of N-terminal-end Valin residue of beta chain of HbA1 by IFCC. HbA1c is frequently used for long and mid-term monitoring of diabetes and evaluation of risk of diabetic complication development. Today there are many glycated Hb evaluation methods developed. HPLC/ESI/MS and HPLC/CE methods has been refered as reference methods by IFCC. The reference methods principle is based on the ratio of hexapeptides formed by digestion of beta chain by endopeptidase Glu-C to total hexapeptides. HPLC/ESI/MS gives the best results due to the measurement of specific measurement of N-terminal glycation of beta chain of Hb.In this study, both HPLC and immunoassay methods used in our laboratory had been compared to the reference method HPLC/ESI/MS. Two groups composed including 27 health subjects and 27 diabetes patients. There is a correlation between HPLC/ESI/MS method with HPLC and immunoassay methods in both healthy subjects (0,8972, 0,8875 respectively) and diabetic patients (0,9243, 08588 respectively).All HPLC, immunoassay and HPLC/ESI/MS methods wthin-day and inter-day reproducibilities were tested and has been found in heathly subjects as 3,87;4,4, 3,93;4,22, 2,07;2,3 and in diabetic patients as 3,47;3,9, 3,34;3,82, 1,74, 1,9 respectively.In conclusion: results obtained from both methods are consistent with the results of the reference method but within-day and inter-day reproducibility studies showed that both methods have higher %CV values compared to HPLC/ESI/MS methods.Key Words: HbA1c, HPLC/ESI/MS, HPLC, Immunoassay