Koroner bypass cerrahisinde greft olarak kullanılan safen venin hazırlanmasında endotel hasarı: Işık ve elekron mikroskopik inceleme

Abstract

ÖZET İnsan safen venini greft olarak kullanmada en iyi hazırlama tekniğini tayin etmek ve tartışmak amacıyla solüsyon ve basınç değişkenlerinin ven morfolojisine olan etkisi taramalı elektronmikroskopisi ve ışık mikroskopisi ile karşılaştırıldı. Aorta koroner bypass operasyonu yapılacak olan 10 hastadan alınan safen ven örnekleri her bir parça 3-4cm uzunlukta olmak üzere 7 segmente bölündü ve 7 grup oluşturuldu. Grup 1 kontrol olarak alındı. Grup 2 ve 3'de şalin ve heparin solüsyonu 28°C'de 100 mmHg ve 300 mmHg basınçla, Grup 4-5'te kan-heparin solüsyonu 28°C de 100 mmHg ve 300 mmHg basınçla, Grup 6-7'de kan-salin-heparin solüsyonu 28°C de 100 mmHg ve 300 mmHg basınç ile venlere gerginlik oluşturacak şekilde uygulanıp parçalar ilgili solüsyonlarda 1 saat bekletildi. Daha sonra her bir parça ikiye bölünerek 1. parçalar %101uk tamponlanmış formalin solüsyonuna alınıp rutin ışık mikroskopisi takibinden sonra H+E (Hematoxylin-Eosin) ve Elastik Van Gieson (Verhoeff) ile boyanıp incelendi. 2. parçalar soğuk tamponlanmış (pH7-2) %3'lük gluteraldehid ile invivo arteriel basınca karşılık gelen lOOmmHg ile perfüze edildi. Rutin elektronmikroskopik takipten sonra SEM'de (scaning elektron mikroskopi) değerlendirildi. Işık mikroskopik ve SEM düzeyindeki incelemelerde patolojik hasar endotelyal hücre seperasyonu, endotelyal hücre kaybı, açığa çıkan bazal membran, intimal ödem ve medial ödem, şeklinde değerlendirildi. Bu patolojik hasarlar 0-4 arasında skorlandı.Her bir grup için ortalama skorlar elde edildi. Grup 1 (kontrol)'de 0.6±0.5, Grup 2'de (şalin- heparin-100 mmHg-28°C) 6.6±0.5, Grup 3'de (salin-heparin-300 mmHg-28°C) 17±0.7, Grup 4'de (kan-heparin- 100 mmHg-28°C) 5-6±0.5, Grup 5'de 24(kan-heparin-300 mmHg-28°C) 12±0.7, Grup 6'da (kan-salin-heparin-100 mmHg-28°C) 7.6±0.5, Grup 7'de (kan-salm-heparin-100 mmHg 28°C) 17.5±1.3 olarak bulundu. Grup 4'te (kan-heparin-lOOmniHg 28°C) veriler, diğer grupların skorlarına kıyasla kontrol grubundaki skor sonucuna en yakın skor olarak yorumlandı. Bu grup her nekadar bölgesel endotelyal kayıp ve endotelyal ayrılma görülmüş olsa bile istatistiksel olarak bu gruba ait (Grup 4) skor sonucu, Grup 5'e göre (kan-heparin-300 mmHg-28°C (p<0.0001), Grup 2'ye göre salin-heparin-100 mmHg-28°C (p<0.02), Grup 3'e göre salin-heparin-300 mmHg -28°C (p<0.0001), Grup 6'ya göre salin-kan-heparin-100 mmHg -28°C (p<0.0004) ve Grup 7'ye göre salin-kan-heparin-300 mmHg-2800 (p<0.0001) anlamlı bulundu. Sonuç olarak safen venlerinin en iyi kan-heparin solüsyonunda 100 mmHg basınç altında hazırlanmasının, endotelyal yüzeyin korunması açısından en uygun koşul olduğu kanısına varıldı. 25

SUMMARY In order to determine and discuss the optimal preparation technique to use the human saphenous vein as a greft, the effects of solution and pressure variables on vein morphology was compared by scanning electron microscopy and light microscopy. Saphenous vein specimens obtained from 10 patients who will undergo aorta coronary bypass operation were divided into 7 segments, each segment 3-4cm. long and 7 groups are formed. Group I was taken as control. In groups 2 and 3, saline-heparin solution, in groups 4 and 5 blood-heparin solution and in groups 6 and 7 blood-saline-heparin solution were applied at 28°C under 100 mmHg. and 300 mmHg. pressure producing a distension in the veins and the segments were kept in related solutions for one hour. Then, each segment was divided into two pieces. The first pieces were examined under a routine light microscope in %10 buffered formalin solution and a second examination was performed after staining with H+E (Hematoxylin-Eosin) and Elastic Van Gieson (Verhoeff). The second pieces were perfused with cold buffered (pH 7.2) %3 gluteraldehide under lOOmmHg. which is equivalent to in vivo arterial pressure. Following routine electron microscopic examination, and evaluation with SEM (scanning electron microscope) was made. In the examinations performed with light microscopy and SEM, pathological damage was evaluated as endothelial cell seperation, endothelial cell loss, exposure of the basement membrane, intimal edema and medial edema. These pathological damages was scored between 0 and 4. Median scores were calculated for each group. The median scores were as follows: 0.6±0.5 in Group 1 (control), 6.6±0.5 in Group 2 (saline- heparin-100 26mmHg-28°C), 17±0.7 in Group 3 (saline-heparin- 300 mmHg-28°C), 5.6+0.5 in Group 4 (blood- heparin- 100 mmHg-28°C), 17.±0.7 in Group 5 (blood- heparin-300 mmHg-28°C), 7.6±0.5 in Group 6 (blood-saline- heparin-100 mmHg-28°C), 17.5±1.3 in Group 7 (blood-saline- heparin-100 mmHg-28°C). The scores in Group 4 was interpreted as the closest to control group compared to the scores of other groups. Although local endothelial loss and endothelial seperation was observed in Group 4, the score of this group was found to be statistically significant compared to Group 5 (blood-heparin-300 mmHg-28°C) (p<0.02). Group 3 (sahne-heparin-300mmHg-28°C) (p<0.0001), Group 6 (saline-blood-heparin-100mmHg-28°C) (p<0.0004) and Group 7 (saline-blood-heparin-300 mmHg-28°C) (p<0.00011). In conclusions, the preparation of saphenous veins in blood-heparin solution under 100 mmHg. of pressure was found to be the optimal preparation technique for the prevention of endotelial surface. 27