Glukanaz (likenaz) enzimini kodlayan genin farklı organizmalarda çalıştırılması olanakları

Abstract

ÖZET Mehmet BÜYÜKCELİK KAHRAMANMARAŞ SÜTÇÜ İMAM ÜNİVERSİTESİ FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ ZOOTEKNİ ANADİLİM DALI YÜKSEK LİSANS TEZİ ÖZET GLUKANAZ (LIKENAZ) ENZİMİNİ KODLA YAN GENİN FARKLI ORGANİZMALARDA ÇALIŞTIRILMASI OLANAKLARI Mehmet BUYUKÇELİK Danışman: Yrd. Doç. Dr. M. Sait EKİNCİ Yıl: 2002 Sayfa : 38 Jüri : Yrd. Doç. Dr. M. Sait EKİNCİ (Başkan) : Prof. Dr. Ercan EFE : Doç. Dr. Şengül KARAMAN Bu araştırmada p-glukanaz (likenaz) enzimini kodlayan genin farklı organizmalarda çalıştırılması amaçlanmıştır. İlk aşamada genin Escherichia coli'de çalışması ve enzimin genel özelliklerine bakılarak hayvan beslemede önemli bir potansiyele sahip olup olmadığı incelenmiş ve enzimin hayvan besleme de kullanılmasında önemli bir kriter olan pH değişimlerine gösterilen uyum bakımından önemli özelliklere sahip olduğu tespit edilmiştir. Enzimi pratikte kullanma olanağı verecek olan laktik asit bakterilerine transferi için gerekli olan çalışmalar yapılmış ve bunun ilk aşaması olan taşıyıcı araç olarak kullanılacak olan E.coli/Streptococcus shuttle vektörü pTRW10 nun Streptococcus thermophilus'a transferi ve orada çalışması gösterilmiştir. Alıcı mikroorganizmalara transfer edilen yabancı genin kodladığı proteinin bol miktarda üretilmesine imkan verecek olan alıcı organizmaların proteolitik aktivitelerinin ortadan kaldırılması için ethidium bromid ile mutasyon çalışmaları yapılmıştır. Bir model oluşturması ve ethidium bromid ile mutasyonun yapılabildiğini göstermek açısından ilk olarak Bacillus subtilis'in a-amilaz geni üzerinde çalışılmıştır. Ethidium bromid ile a-amilaz geninin mutasyonu başarılmış ve elde edilen mutant bakterilerin a-amilaz bakımından negatif oldukları gözlenmiştir. Anahtar kelimeler: Glukanaz, gen transferi, ekspresyon, mutasyon III

ABSTRACT Mehmet BÜYÜKCELİK KAHRAMANMARAŞ SÜTÇÜ İMAM UNIVERSITY INSTITUTE OF NATURAL AND APPLIED SCIENCES DEPARTMENT OF ANIMAL SCIENCE MSc THESIS ABSTRACT POSSIBLE EXPRESSION OF GLUCANASE (LICHENASE) ENZYME ENCODING GENE IN DIFFERENT ORGANISMS MEHMET BÜYÜKCELİK Supervisor: Asist. Prof. Dr. M. Sait EKİNCİ Year : 2002 Pages : 38 Jury: Assist. Prof. Dr. M. Sait EKİNCİ (President) : Prof. Dr. Ercan EFE : Assoc. Prof. Dr. Şengül KARAMAN In this work the transformation and expression of P-glucanase (lichenase) enzyme encoding gene in different organisms was aimed. Initially gene was transferred and expressed in Escherichia coli to determine enzyme specifications whether it has a potential for animal feeding. pH stability and optimum of the enzyme, which is important specification in animal feeding, were found to be encouraging. To transfer gene into lactic acid bacteria for practical uses initially the E.coli/Streptococcus shuttle vector pTRWIO which will carry the gene, was transferred to Streptococcus thermophilus. Mutation of host microorganisms for inhibition of proteolytic activity, which is essential for production of foreign protein in host organisms, was performed by ethidium bromide mutation. First of all to demonstrate the mutation by ethidium bromide a-amylase of Bacillus subtilis was used as a model. Mutation of a-amylase gene of Bacillus subtilis was achieved and a-amylase negative bacteria obtained..Key Words: Glucanase, gene transfer, expression, mutation IV