Değişik prezervasyon solüsyonlarının hipotermik ortamda ince barsak dokusu üzerindeki etkilerinin morfolojik açıdan değerlendirilmesi

Abstract

27 ÖZET înce barsağın transplantasyondaki giderek artan kullanımı optimal prezervasyon tekniklerinin geliştirilmesini gerektirmektedir. Bu çalışmanın amacı, sıçan ince barsağının hipotermik Euro-Collins ve Ringer Laktat solüsyonlan ile prezervasyonunda zamana bağlı değişiklikleri ışık ve elektron mikroskopi düzeylerinde incelemektir. İnce barsak perfüzyonu, çıkan aorta yoluyla Euro-Collins ya da Ringer Laktat solüsyonu ile gerçekleştirildi. Intestinal lümen soğuk serum fizyolojik ile yıkandıktan sonra perfüzyon yapılmış greftler 4 °C'de 0, 3, 6 ve 12 saat yukarıda belirtilen solüsyonlarda prezerve edildi. Kontrol grubunda ise prezervasyon 4 °C'de serum fizyolojik ile yapıldı. îleumdan alman biopsi örnekleri ışık ve elektron mikroskopisi için hazırlandı. Işık mikroskopi örnekleri %10 formalin solüsyonu içinde fikse edildi. Rutin parafin takibinden sonra kesitlere Hematoxilin ve Eosin, Masson'un trikrom ve Periyodik Asit-Schiff boyama teknikleri uygulandı. înce barsağın 6 saatlik prezervasyonu sonunda Ringer Laktat solüsyonu ile iyi ve Euro-Collins solüsyonu ile orta derecede prezervasyon görülmektedir. 12 saatlik prezervasyon sonunda ağır mukoza harabiyeti, özellikle kriptlerde, her iki solüsyon ile oluşmaktadır. İstatistiğe göre 3üncü ve 6ncı saatte alınan biopsilerin sonuçları gruplar arasında anlamlı farklar ortaya çıkartmaktadır. Her iki saatte Euro-Collins ya da Ringer Laktat grubu kontrole göre daha başarılı olmuştur. Euro-Collins solüsyonuna göre 3üncü saatte Ringer Laktat solüsyonu ile alman sonuçlar anlamlı derecede üstünlük göstermektedir. Ullrastüktürel düzeyde prezervasyon hasarım anlamak için goblet ve Paneth hücrelerini de içine alan villus ve kriptlerin epitel katmam, hücre bağlantıları ve muskularis eksternası incelendi. Euro-Collins solüsyonu ile yapılan prezervasyon ile ince barsağın 3üncü saatte iyi, 6ncı saatte ise orta derecede prezerve olduğu gösterildi. 12nci saatte geri dönüşümsüz doku hasan vardı. Ringer Laktat'ta prezervasyon yapılmış ince barsakta 3üncü ve 6ncı saatlerde iyi prezervasyon görüldü. 12inci saatte geri dönüşümsüz hasar oluştu. Mukoza rejenerasyonuna izin vermeyen kript hasarı geri dönüşümsüz hasar olarak nitelendirildi. İnce barsak mukozasının scanning elektron mikroskop incelenmesinde sıra ile villus epitel rüptürü, lamina proprianın açıkta görülmesi ve villus kaybolması şeklinde mukozanın soğuk iskemi süresine bağlı giderek artan hasan görülmektedir. Bu bulgular ışık ve transmisyon elektron28 mikroskopi sonuçlar ile uyum göstermektedir. En ağır hasar kontrol grubunda oluşurken, Ringer Laktat grubunda en iyi sonuç elde edildi. Bu sonuçlar, Euro-Collins ve Ringer Laktat solüsyonlarının ince başağın kısa süreli prezervasyonu için uygun olduklarını göstermektedir. Uzun süreli prezervasyon için ise prezervasyon solüsyonlarının ve/veya tekniklerin geliştirilmesi gerektiğini düşünmekteyiz.

29 SUMMARY The increasing use of the small bowel for transplantation necessitates the development of optimum preservation techniques. The aim of our study was to investigate time-related alterations of the rat small bowel during preservation of the organ in hypothermic Euro-Collins and Lactated Ringer solutions in light microscopic and electrone microscopic levels. Small bowels were perfused via the ascending aorta with either Euro-Collins or Lactated Ringer solution. After flushing of the intestinal lumen with cold saline solution perfused grafts were placed in respective preservation solutions at 4 °C for 0, 3, 6 and 12 hours. Preservation in saline solution at 4 °C was performed for controls. Biopsy samples of the ileum were prepared for examination at the light and electrone microscopic levels. Samples for light microscopy were fixed in 10 % Formaline solution. Routine light microscopy with Hematoxylin and Eosin, sections stained with Masson'un Trichrome and the Periodic Acid Schiff reaction revealed good preservation of the small bowel mucosa after 6 hours of preservation in Lactated Ringer solution and moderate preservation in Euro-Collins solution. Severe damage of the mucosa, especially of the crypts, occurred after 12 hours of preservation in both solutions. According to the statistic the results obtained from the biopsies after 3 and 6 hours showed significant differences beetween the groups, indicating that preservation to both time has been more successful in the Euro-Collins and Lactated Ringer groups compared with the control group. The results obtained with Lactated Ringer solution after 3 hours were significantly superior compared with Euro-Collins solution. Assessment of preservation injury in the ultrastructural level was evaluated by examination of the epithelial cell layer of the villi and the crypts, including goblet and Paneth cells, the junctional complex, and the external muscle layer. Preservation in Euro-Collins solution showed good preservation of the small bowel tissue after 3 hours, moderate preservation after 6 hours and irreversible cell damage after 12 hours of preservation. Small bowel preserved in Lactated Ringer solution showed good preservation at 3 and 6 hours of cold ischemia and irreversible cell damage at 12 hours of preservation, irreversible cell damage has been defined by crypt cell alterations no longer admitting mucosal regeneration. These findings were reflected by the examination of small bowel tissue by scanning electrone microscopy, showing gradually increasing damage of the mucosal surface with increasing cold ischemic `EC ¥teffi(5?lETSM MBMM30 period from rupture of the villus epithelium and denuded lamina propria to complete loss of villi, most severe in the control group, with indicating better results for the Lactated Ringer group. According to these results we conclude that both Euro-Collins and Lactated Ringer solutions are suitable for short term preservation of the small bowel and that further ameliorations of the preservation solutions and/or techniques are required for long term preservation.