Programlı ve mekanik dondurma metodları ile kriyopreservasyonu sağlanan hematopoetik kök hücrelerin canlılık, koloni oluşturma kapasitesi ve CD34 (+) hücre sayısı açısından karşılaştırılması

Abstract

24 7.ÖZET Periferik kan kök hücreleri (PKKH), genellikle programlı dondurucularla dondurularak saklanmaktadırlar. Fakat programlı dondurma (PD) çok zaman ve iş gücü gerektirir ve pahalıdır. Daha basit ve zahmetsiz olan mekanik dondurmanın, PD'ya alternatif olduğunu gösteren çalışmalar vardır. Bu çalışmada PD ve mekanik dondurma (MD) yöntemlerini hücre canlılığı, koloni oluşturma yetenekleri ve CD34(+) hücre kaybı açısından karşılaştırmayı planladık. Altı donörün PKKH PD, 19 donörün PKKH MD metodu ile donduruldu. PD metodu ile dondurulup saklanan PKKH'nin çözüldükten hemen ve 1 saat sonra bakılan canlılık oranları ve 14. günde koloni sayımları arasmda istatistiksel fark bulunamadı (0. saat: canlılık=%69.5±9.3, CFU-mix sayısı=156.3±17.7 ve 1. saat: canlıhk=%59.5±8.0, CFU-mix sayısı=163.7±21.1). MD metodu ile dondurulan hücrelerin, çözüldükten sonra 1 saat oda ısısında bekletildiklerinde canlılıkları ve 14. gün koloni sayıları belirgin biçimde düşüş gösterdi (0. Saat: canlılık=%47.3±22.8, CFU-mix sayısı=97.0±35.0, l.saat: canlılık=%27.7±18.7, CFU-mix sayısı=90.2±30.8 p=0.0003, p=0.0002). İki metod ile dondurulan hücrelerin çözüldükten hemen sonra ve 1. saatte bakılan canlılıkları ve 14. Gündeki koloni sayıları karşılaştırıldığında, PD ile dondurulan hücrelerin canlılıkları ve CFU-mix sayısı hem 0. saatte hem de 1. saatte daha iyi bulundu. PD metodu ile hücre canlılığının ve hematopoietik aktivitenin daha uzun süre korunabildiği gözlenmiştir. PD metodu ile dondurularak saklanmış PKKH' in çözüldükten 125 saat sonra canlılıklarında ve hematopoietik aktivitelerinde bir farklılık gözlenmemiştir. CD34(+) hücre kaybı açısından iki yöntemi karşılaştırdığımızda her iki yöntemde de %5 civarında kök hücre kaybı olduğu gözlenmiş olup, bu kayıp makul sınırlarda olarak kabul edilmiştir. Bu sonuçlar ışığında; PD metodu ile kriyopreservasyona devam edilmesi gerektiğini düşünüyoruz.

26 8.SUMMARY Peripheral blood stem cells (PBSCs) are usually cryopreserved with rate- controlled programmed freezing (RCPF). But this method is expensive and time consuming. A simplified method named mechanical freezing (MF) for cryopreservation of PBSCs at -80 C without rate-controlled freezing was established for cryopreservation. In this study we compared cell viability, colony forming potential and CD34(+) cell loss after thawing of cryopreserved PBSC with RCPF and MF methods. Six subject's PBSCs were cryopreserved with RCPF and 19 subject's PBSCs were cryopreserved with MF. There was no significant difference between the cell viability and 14th day colony count, just after and 1 hour after thawing in RCPF(0. hour: viability=%69.5±9.3, CFU-mix count= 156.3±17.7, 1st hour:%59.5±8.0, CFU-mix count=163.7±21.1). The cell viability and colony forming potential of PBSCs, cryopreserved with MF decreased significantly one hour after thawing (0. hour: viability=%47.3±22.8, CFU-mix count=97.0±35.0, 1st hour: viability=%27.7±18.7, CFU-mix count=90.2±30.8 p=0.0003, p=0.0002). When the two methods are compared, the cell viability and colony forming potential was better with RCPF just after and 1 hour after thawing. As a result we observed that in RCPF the viability and hematopoietic activity of PBSC is well preserved and the stem cell viability does not decrease in room temperature for one hour. CD34(+) cell loss was about 5% with both methods and this is in acceptable limits. In the light of these results we suggest to continue cryopreservation with RCPF.