Timpanotomi uygulanan sıçanlarda reaktif oksijen türlerinin incelenmesi ve vitamin E kullanımı ile reaktif oksijen türlerinin seviyesindeki değişikliğin değerlendirilmesi

Abstract

30 ÖZET Miringotomi sonrası gelişen TS'nin etiyolojisini inceleyen çalışmalarda ortamdaki oksijen miktarının artışının ve oluşan reaktif oksijen türlerinin (ROT) etkili olduğu öne sürülmekle, beraber ROT miktarı çalışmaların hiç birinde kantitatif olarak ölçülmemiştir. Çalışmamızda, timpanotomi uygulanan sıçanların timpanik membran ve orta kulak mukozalarında luminol ve lusigenin. ile amplifiye edilmiş kemiluminesans ile ROT'un kantitatif ölçümü ve vitamin E uygulanması ile ROT miktarındaki muhtemel değişikliğin kantitatif olarak ölçülmesi, timpanik membranın otomikroskopik ve histopatolojik olarak incelenmesi amaçlandı. Çalışma Sprague-Dawley cinsi 40 sıçan üzerinde gerçekleştirildi. Deney hayvanları beş gruba ayrıldı. Birinci grup haricindeki tüm sıçanlara mikroskop altında her iki timpanik membranda arka-üst kadranda standart bir perforasyon oluşturuldu. İkinci gruba timpanotomi uygulandı, topikal veya sistemik tedavide bulunulmadı. Üçüncü grupta timpanomiyi takiben topikal zeytinyağı, dördüncü grupta ise topikal vitamin E uygulandı. Beşinci grupta timpanotomiyi takiben sistemik vitamin E uygulandı. 24 saat sonra deney hayvanları sakrifiye edilerek, timpanik membranlan otomikroskopi ile incelendi, ardından dekapite edildi ve temporal bullaları çıkarılarak biyokimyasal ve histolojik olarak değerlendirildi. Çalışmamızda, miringotomi uygulanan sıçanların timpanik membran ve orta kulak mukozalarında ROT seviyesinde istatiksel olarak anlamlı artış olduğu görüldü. ROT seviyesinin yüksek seyrettiği kulaklarda histolojik olarak sklerotik değişikliklerin olduğu izlendi. Çalışmamızın diğer önemli olan kısmında topikal uygulanan E vitamininin, sıçan kulaklarında ROT seviyesinin düşürülmesinde ve sklerotik değişikliklerin engellenmesinde başarılı olduğu gösterildi.

31 ABSTRACT Recent studies have established a strong relationship between the development of myringosclerosis and reactive oxygen species (ROS). The aim of the present study was to directly detect the ROS in tympanic membrane and middle ear mucosa of the rats by measuring luminol amplified chemiluminescence, and to evaluate the changes in the levels of ROS treated with vitamin E, and also examine the possible changes in the tympanic membranes otomicroscopically and histologically. Forty healthy Sprague-Dawley rats were divided into five groups of 8 animals each. Except group 1, all other groups were bilaterally myringotomized. Group 2 received no treatment, group 3 was treated with topical olive oil, group 4 received topical vitamin E, and group 5 received intramuscular vitamin E. After 24 hour of myringotomy, tympanic membranes were examined otomicroscopically and thereafter tympanic membranes and middle ear mucosa were peeled off. Right ears of the animals were used for biochemical assay, and left ears were used for histologic study. ROS levels were significantly decreased in group 4 with topical application of vitamin E compared with nontreated and myringotomized group 2. The ROS levels were also decreased in the group 5, although it was not statistically significant compared with group 2 and 3. Histological studies confirmed sclerotic changes in the nontreated myringotomized animals. The tympanic membranes of groups 2 and 3 showed white chalky pattern of sclerotic changes whereas group 4 and 5, except two animals of group 5, lacked of these changes. Although the relationship between the development of myringosclerosis and ROS is well documented previously, this is the first study that directly measured the levels of ROS in the tympanic membrane and middle ear mucosa. These results are relevant because they correlate with histologic findings. Also it has been demonstrated that topically applied vitamin E had been effective in decreasing the ROS levels.