Detection of shiga toxin genes (stx1 and stx2) in escherichia coli o157:h7 isolated from meat products

Abstract

Bu çalışma, et ürünlerinde kültürel metot ve Multiplex PCR ile Escherichia coli O157:H7 izolasyonu ve bu bakterideki stx1and stx2 virülans genlerinin tespit edilmesi için yapılmıştır. Bu amaçla 180 et ürünü örneği (50 kebap, 50 kıyma, 40 shawarma-döner ve 40 hamburger) Duhok- Irak'tan temin edilmiştir. Örnekler novobiocin içeren Modified Trypticase Soy Broth'ta ön zenginleştirmeye tabi tutulmuş daha sonra BCIG (5- bromo4-chloro-3-indoxyl- D-glucuronide) ve cefixime içeren sorbitol MacConkey Agar'a ekilmiştir. İzolatlatdan E. coli O157:H7 tespiti için Eosin Methylene Blue (EMB) ve Haemorrahgic Colitis (HC) Agar'a ekim yapılmıştır. Et ürünlerinden 48 tanesinde (%26,6) sorbitolü fermente edemeyen şüpheli koloniler tespit edilmiştir. Bu koloniler API E 20 testi ve RapID one sistemi ile doğrulanmıştır. Doğrulama işlemi sonunda 35 örnekte (%19, 9) E. coli O157:H7 tespit edilmiştir. PCR ile sonraki doğrulama işleminde 7 örnekte (%3, 8) O157 antijeni, 9 örnekte ise (%5) H7 geni bulunmuştur. Ayrıca bakteri izolatlarında PCR spesifik primerlerle Shiga toxin genlerinin (stx1 ve stx2) varlığı araştırılmış ve 6 adet E. coli O157:H7'de stx1 geni, 1 tanesinde ise stx2 geni tespit edilmiştir.

This study was conducted to identify the prevalence of the Escherichia coli O157:H7 and determine the virulence factors of stx1and stx2 genes in meat products by culture and multiplex PCR methods. One-hundred eighty meat products (50 kebab, 50 ground meat, 40 shawarma, 40 hamburger) were sampled from Duhok province of Iraq. Samples were enriched in novobiocin containing Modified Tryptic Soy Broth and plated onto BCIG (5- bromo4-chloro-3-indoxyl- D-glucuronide) and cefixime supplemented Sorbitol MacConkey agar. Then typical colonies were plated on EMB and HC agar for isolating the E. coli O157:H7. There were 48 (26.6%) suspected non-sorbitol fermenting (NSF) colonies in meat products. Those suspected colonies were then confirmed with biochemical tests (API E 20 test and RapID one system). The results showed that 35 (19.9%) samples were found to be positive for E. coli O157:H7. These results were then confirmed with PCR. These results showed that there were 7 (3.8%) and 9 (5%) samples found to be positive for O157 and H7 antigen genes, respectively. The bacterial isolates were also identified for the presence of stx1 and stx2 genes. The stx1 gene was detected in 6 isolates while the gene stx2 was detected in 1 isolate of E. coli O157:H7.