Kahramanmaraş ilindeki gökkuşağı alabalığı işletmelerinde Yersinia ruckeri`nin konveksiyonel kültür ve moleküler yöntemlerle teşhisi ve antibiyotik duyarlılıklarının saptanması

Abstract

Yaptığımız çalışma; Kahramanmaraş ilinde bulunan gökkuşağı alabalığı (Oncorhynchus mykiss Walbaum 1792) işletmelerinde balıklardan alınan örneklerden Yersinia ruckeri'nin bakteriyolojik kültür yöntemi ile izolasyon ve identifikasyonu yanı sıra Polimeraz Zincir Reaksiyonu kullanılarak etken DNA'sının amplifikasyonu amaçlanmıştır. Bu amaçla Nisan 2013 ve Eylül 2014 tarihleri arasında 16 farklı alabalık işletmesinden, Gökkuşağı alabalıklarından, karaciğer, dalak, böbrek ve bağırsaklardan örnekler alınmıştır. Toplam 115 örnek incelenmiştir. Bunlardan 14 örnekte Yersinia ruckeri tespit edilmiştir. Çalışma yapılan 16 farklı işletmeden, 7 tanesinde hastalık tespiti yapılmıştır.Enterik kızıl ağız hastalığı etkeni olan Yersinia ruckeri, 10 oC ve üzeri su sıcaklığında hastalık oluşturmaktadır. Hastalık belirtileri bu su sıcaklığı değerinden sonra görülmektedir. Bu nedenle numune alımında su sıcaklıklarının arttığı dönemler seçilmiştir. Bölge ortalama 800 metre rakıma sahip olup, genellikle bahar ve yaz dönemlerinde su sıcaklıkları artmaktadır. Bu nedenle özellikle 2013 yılı ilkbahar, yaz ve sonbahar ile 2014 yılı ilkbahar ve yaz mevsiminde alabalık işletmelerinde kontroller yapılmıştır. Balık numunelerinin seçiminde; rengin koyulaşması, ağız iç ve dış kısımlarında, operkulumlarda, vücudun dış yüzeyinde ve yüzgeçlerin tabanında kanamalar, karında şişlik, ekzofalmus belirtisinin bir veya birkaçını gösteren ya da gayesizce su yüzeyinde yüzen 5-200 gram arası balıklar tercih edildi. Hastalık belirtisi tespit edilmeyen bazı alabalık işletmelerinde bazen hiçbir belirti göstermeyen balıklar numune olarak alındı. Bu amaçla, gökkuşağı alabalık işletmeleri tarandı. Alınan numunelerde laboratuvar koşullarında otopsi yapıldı.Yersinia ruckeri 'nin tespiti ve ayrıştırılması için balıkların karaciğer, dalak, böbrek ve bağırsaklarından alınan örneklerin önce besi yerlerine ekimi yapıldı. Bu amaçla Brain Heart Infusıon Agar (BHIA) ve Tryptic Soy Agar (TSA) tercih edildi. Alabalık işletmelerinden alınan bu örneklerden elde edilen saf suşlara biyokimyasal tanımlama testleri; Biolog Sistemi (The biolog GENIII micro plate) uygulanıp fenotipik özellikleri incelenmiştir. Bakterinin fenotipik ve biyokimyasal özelliklerine göre belirlenen 14 adet Yersinia ruckeri suşunun Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PZR) tekniğiyle teyit edilmesinde spesifik primer kullanıldı. Takiben bu suşların tamamının moleküler olarak Yersinia ruckeri olduğu teyit edildi. Ayrıca antibiyotiğe karşı duyarlılığını saptamak için antibiyogram testi yapıldı.Sonuç olarak; Kahramanmaraş ilinde Yersinia ruckeri teşhisi doğru ve kesin olarak yapıldı. Kahramanmaraş ilinde gökkuşağı alabalık yetiştiricilik tesislerinin bazılarında Enterik Kızıl Ağız Hastalığı mevcuttur. Bu nedenle, bölgede bulunan işletmeler; aşı uygulamalı, balıklarda bağışıklık sistemini artırıcı vitaminler kullanmalı, kültürel önlemleri almalı, balıklarda oluşacak stres faktörlerini en aza indirmeli, aşırı stoklamadan kaçınmalıdır. Buna rağmen, hastalık tesiste görülmüş ise önce hastalık laboratuvar koşullarında tam olarak tespit edilmeli, antibiyotiğe duyarlılığı saptanmalı, hastalığa karşı ilaçlı mücadele başlatılmalıdır.Anahtar Kelimeler: Gökkuşağı Alabalığı, Yersiniozis, Yersinia ruckeri, BIOLOG GEN III, PCR, antibiyogram test

What we do is work; Located in the province of Kahramanmaras of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss Walbaum 1792) in fish taken from the sample of Yersinia ruckeri's bacteriological culture method with insulation and appreciation as well as polymerase chain reaction amplification factors using DNA was aimed. For this purpose, from business 16 different trout between September 2014 and April 2013 were taken in samples the gut and kidney, spleen, liver rainbow trout. Total of 115 samples were examined. Of these, 14 have been identified in Yersinia ruckeri example. Working in 16 different from business, 7 of them were the detection of the disease.Enteric red mouth disease factor is Yersini ruckeri, 10 oC and higher water temperature constitute illness. Symptoms of the disease that are seen after the water temperature value. Therefore the temperature of the water increases in the purchase of a sample chosen periods. At an altitude of 800 meters on average, the region has generally been increasing water temperatures in the spring and summer period. For this reason, especially the year 2013 spring, summer and fall, the season of spring and summer of 2014 with trout in control again. In the selection of the sample of fish; darkening, the internal and external parts of the mouth, the body's outer surface and fins in operkulum are at the base of the bleeding, abdominal swelling, indicating that one or more of the symptoms of ekzofalmus or other flots floating on the water's surface from 5 to 200 grams of fish were preferred. Some trout have not been detected signs of disease in fish samples did not show any symptoms, sometimes taken as. To this end, we screened businesses in rainbow trout. Samples taken at autopsy was performed under laboratory conditions.Yersinia ruckeri to fish identification and parsing of the liver, spleen, kidney and intestines taken from specimens before fattening their cultivation was made.For this purpose, Brain Heart produced by Agar (BHIA) and Tryptic Soy Agar (TSA) were preferred. The pure strains obtained from these samples from trout farms were evaluated phenotypic characteristics applied with Biolog System Connection (The Genie biolog micro plate) and Biochemical tests. Specific primer were used to confirm 14 Yersinia ruckeri with PCR after determined according to bacteria the phenotype and genotype characteristics. Subsequently, these strains were confirmed as Yersinia ruckeri with DNA.As a result; In the province of Kahramanmaras Yersinia ruckeri diagnosis was made correctly and precisely. In the province of Kahramanmaras, when rainbow trout aquaculture in some of Enteric Red mouth disease is available. Therefore, enterprises located in the zone; vaccination is applied, the fish immune system booster vitamins should I use, cultural measures will occur in fish stress factors, minimize, refrain from excessive buffer at. Despite this, the disease was seen in the facility before the disease must be found exactly under laboratory conditions, they must be started to fight against disease, antibiotic sensitivity identified medicated.Key Words: Rainbow trout, Yersiniozis, Yersinia ruckeri, BIOLOG GEN III, PCR, Antibiotic susceptibility testing.