Reaktif red 120 bağlı poli (2-hidroksietil metakrilat) membranlarına lizozim adsorpsiyonu

Abstract

ÖZET REACTIVE RED 120 BAĞLI POLİ(2-HİDROKSİETİL METAKRİLAT) MEMBRANLARINA LİZOZİM ADSORPSİYONU ÖZDEMİR, Hasan Kırıkkale Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Biyoloji Anabilim Dalı, Yüksek Lisans Tezi Danışman : Prof.Dr.M.Yakup ARICA Ortak Danışman: Yard.Doç.Dr Gülay BAYRAMOĞLU Temmuz 2002, 49 Sayfa Procion Red 120 bağlı yeni gözenekli hidrojel yapıda poly(2-hidroksietil metakrilat), pHEMA, membranları afinite destek malzemesi olarak hazırlandı ve model protein olarak seçilen lizozimin adsorpsiyonu çalışmalarında kullanıldı. Afinite pHEMA membranları, 2-HEMA monomeri kullanılarak UV ışığı ve AIBN başlatıcısı varlığında fotopolimerizasyon yöntemi ile sentezlendi. Afinite pHEMA membranlar yaklaşık 60 dakikada içerisinde şişme dengesine ulaştı. Boya tutuklanmış membranların denge su miktarı 58±%2 olarak belirlendi ve membrana tutuklanmış Procion Red 120 miktarı 235 umol g`1 olarak bulundu. pHEMA ve pHEMA-boya bağlanmış membranların lizozim adsorpsiyon çalışmaları manyetik olarak karıştırmalı bir hücre içerisinde yapıldı. Bu membranların adsorpsiyon kapasiteleri adsorpsiyon ortamındaki lizozim başlangıç konsantrasyonu, sıcaklık, tuz ve pH değerleri değiştirilerek belirlendi. pHEMA ve pHEMA-boya bağlımembranların lizozim adsorpsiyon kapasiteleri sırasıyla 0.2 mg g`1 ve 48.6 mg g`1 olarak bulundu. Adsorplanan lizozimin tamamı pH 8.0'de 1.0 M KSCN içeren desorpsiyon ortamında 60 dakika içerisinde geri kazanıldı. Anahtar Kelimeler:Polimerizasyon, Lizozim, Adsorpsiyon, İmmobilizasyon, Desorpsiyon, KSCN. II

ABSTRACT LYSOZYME ADSORPTION ONTO REACTIVE RED 120 DERIVED POLY (2- HYDROXYETHYL METHACRYLATE MEMBRANES ÖZDEMİR, Hasan Kırıkkale Üniversty The Graduate School of Natural And Applied Sciences Department of Biology, M.Sc. Thesis Supervisor : Prof.Dr.M.Yakup ARICA Co - Supervisor : Assoc. Prof. Dr. Gülay BAYRAMO?LU July 2002, 49 Pages pHEMA in membrane form was synthesized from poly(2-hydroxyethyl methacrylate), pHEMA, via UV initiated photo-polymerization in the presence of an initiator a,a'-azoisobutyronitrile. Procion Red 120 was covalently attached onto pHEMA membrane as a dye-ligand. The water content of the dye-ligand immobilized membrane was about 58%. The amount of immobilized dye on the membrane surface was found to be as 235 umol g`1. The lysozyme adsorption test on the pHEMA and PHEMA-dye-ligand immobilized was performed in a continuous stirrer cell. The optimum lysozyme conditions were determined by changing the effective adsorpsion parameters such as pH, ionic strength, temperature and initial lysozyme concentration. mLysozyme adsorption capacity of dye-ligand attached membrane was 48.6 mg g`1. Adsorbed lysozyme was desorbed up to 100 % by using 1.0 M KSCN as the desorption agent. It was possible to reuse dye-ligand affinity membranes without significant reduction in the protein adsorption capacity. These features make the dye- ligand very good candidate for use in metal-affinity chelate separation of proteins and would be effective in processing large volume of biological fluid containing a target protein. Keywords:Polymerisation, Lysozyme, Adsorption, immobilization, Desorption, KSCN IV