Procion yellow bağlı pHEMA/Kitosan membranlarının hazırlanması ve lizozim adsorpsiyonunda kullanılması

Abstract

ÖZET PROCION YELLOW BAĞLI pHEMA/KÎTOSAN MEMBRANLARININ HAZIRLANMASI VE LÎZOZÎM ADSORPSİYONUNDA KULLANILMASI ŞİMŞEK, MERİH Kırıkkale Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Biyoloji Anabilim Dalı, Yüksek Lisans Tezi Danışman : Prof. Dr. M. Yakup ARICA Ortak Danışman: Doç. Dr. Gülay BAYRAMOĞLU Ocak 2004, 41 sayfa Procion Yellow 2 bağlı yeni gözenekli hidrojel yapıda poly(2- hidroksietilmetakrilat), p(HEMA/kitosan), membranları afinite destek malzemesi olarak hazırlandı ve model protein olarak seçilen lkozimin adsorpsiyonu çalışmalarında kullanıldı. Afinite pHEMA/kitosan membranları, 2-HEMA monomeri ve kitosan polimer çözeltisi kullanılarak UV ışığı ve AIBN başlatıcısı varlığında fotopolirnerizasyon yöntemi ile sentezlendi. Afinite pHEMA/kitosan membranlar yaklaşık 60 dakikada içerisinde şişme dengesine ulaştı. Boya tutuklanmış membranların denge su miktarı %69 olarak belirlendi ve membrana tutuklanmış Procion Yellow 2 miktarı 189 umol g`1 olarak bulundu. pHEMA/kitosan ve Boyaligand bağlı pHEMA/kitosan membranların lizozim adsorpsiyon çalışmaları manyetik olarak karıştırmalı bir hücre içerisinde yapıldı. Bu membranların adsorpsiyon kapasiteleri adsorpsiyon ortamındaki lizozim başlangıç konsantrasyonu, sıcaklık, tuz ve pH değerleri değiştirilerek belirlendi. PHEMA/kitosan ve boya ligand bağlı pHEMA/kitosan membranların lizozim adsorpsiyon kapasiteleri sırasıyla 7.2 mg g'1 ve 38.6 mg g`1 olarak bulundu. Adsorplanan lizozimin %90'nı pH 8.0'de 1.0 M KSCN içeren desorpsiyon ortamında 60 dakikada içerisinde geri kazanıldı. Anahtar Kelimeler: pHEMA, kitosan, Lizozim, boya ligand, afinite membran, boya ligand afinite kromatografisi

ABSTRACT PROCION YELLOW IMMOBILIZED MEMBRANE COMPOSED OF pHEMA/CHTTOSAN: PREPARATION AND IT APPLICATION TO ADSORPTION OF LYSOZYME ŞİMŞEK, Merih Kırıkkale University Graduate School Of Natural and Applied Sciences Deparment of Biology, M. Sc. Thesis Supervisor : Prof. Dr. M. Yakup ARICA Co-supervisor: AssocProf. Dr. Gülay BAYRAMO?LU January 2004, 41 pages pHEMA/kitosan in membrane form was synthesized from 2-hydroxyethyl methacrylate (HEMA) and chitosan via UV initiated photo-polymerization in the presence of an initiator a,a'-azoisobutyronitrile. Procion Yellow 2 was covalently attached onto pHEMA/chitosan membrane as a dye»ligand. The water content of the dye-ligand immobilized membrane was about 69%. The amount of immobilized dye on the membrane surface was found to be as 189 umol g`'. The lysozyme adsorption test on the pHEMA/chitosan and dye ligand immobilized pHEMA/chitosan was performed in a continuous stirrer cell. The optimum lysozyme conditions were mdetermined by changing the effective adsorption parameters such as pH, ionic strength, temperature and initial lysozyme concentration. Lysozyme adsorption capacity of dye-ligand attached membrane was 38.6 mg ml`1. Adsorbed lysozyme was desorbed up to 90% by using 1.0 M KSCN as the desorption agent It was possible to reuse dye-ligand affinity membranes without significant reduction in the protein adsorption capacity. These features make the dye-ligand very good candidate for use in metal-affinity chelate separation of proteins and would be effective in processing large volume of biological fluid containing a target protein. Keywords: pHEMA, chitosan, lizozim, dye ligand, affinity membrane, dye ligand affinity chromatography IV