Uzatma kolu takılı L-histidin bağlı p(GMA-MMA) afinite mikroküreler ile IgG saflaştırılması

Abstract

ÖZET UZATMA KOLU TAKILI L-HİSTİDİN BAĞLI p(GMA-MMA) MİKROKÜRELER İLE IgG SAFLAŞTIRILMASI ŞENEL, Ayşegül Ülkü Kırıkkale Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Kimya Anabilim Dalı, Yüksek Lisans Tezi Danışman: Doç. Dr. Gülay BAYRAMOĞLU Ocak 2005, 78 sayfa Bu çalışmada, afinite destek malzemesi olarak epoksi grubu içeren, poli (glisidil metakrilat-metil metakrilat), p(GMA-MMA), mikroküreleri süspansiyon polimerizasyon yöntemi ile sentezlendi ve IgG saflaştırmasında kullanıldı. Hazırlanan p(GMA-MMA) mikrokürelerinin epoksi grupları, amonyak ve hekzametilendiamin (uzatma kolu) ile amin gruplarına dönüştürüldü. L-Histidin ligandı, bağlanma ajanı olarak glutarikdialdehit kullanılarak aminlenen veya uzatma kolu takılı p(GMA- MMA) mikrokürelere kovalent olarak bağlandı. Afinite matriksin, IgG'ye seçiciliğini arttırmak üzere, L-Histidin ligandı ile Cu(ll) metal iyonu arasında koordinasyon kompleksi oluşturmak üzere bağlandı. Afinite mikrokürelerin sulu çözeltiden ve insan serumundan IgG uzaklaştırılması vesaflaştırı İmasında performansı incelendi. Tüm afinite mikroküreler için maksimum adsorpsiyon kapasitesi, pH 7.0' de gözlendi. p(GMA-MMA)-L- Histidin, p(GMA-MMA)-uzatma kolu-L-Histidin, p(GMA-MMA)-uzatma kolu- L-Histidin -Cu(ll) mikrokürelerinin adsorpsiyon kapasiteleri sırayla, 56.0, 93.9 ve 142.2 mg/g olarak bulundu. Afinite mikrokürelerin desorpsiyonu glisin-HCI (pH 2.6) çözeltisi ile % 63 oranında gerçekleştirildi. Afinite mikrokürelerin adsorpsiyon kapasitesinde önemli bir azalma olmadan adsorpsiyon-desorpsiyon işlemlerinde tekrar kullanılabilirliği belirlendi. p(GMA-MMA)-uzatma kolu-L- Histidin afinite mikroküreleri ile insan serumundan ayrıştırılan IgG'nin saflığı Yüksek Basınçlı Sıvı Kromatografisi (HPLC) yardımı ile % 84.2 olarak belirlendi. Anahtar Kelimeler: Afinite mikroküre, L-Histidin ligandı, Uzatma kolu, Cu(ll) metal iyonu, Immunoglobulin G

ABSTRACT IMMUNOGLOBULİNE G PURİFİCATİON WiTH SPACER ARM ATTACHED L-HİSTİDİNE IMMOBILIZED p(GMA-MMA) AFFINITY MİCROBEADS ŞENEL, Ayşegül Ülkü Kırıkkale University Graduate School of Natural and Applied Sciences Department of Chemistry, M.Sc.Thesis Supervisor: Assoc. Prof. Dr. Gülay BAYRAMO?LU January 2005, 78 pages In this study, epoxy group containing affinity support, poly(glycidyl methacrylate-methylmethacrylate), p(GMA-MMA), microbeads were prepared by suspension polymerisation. The adsorption of IgG from solution and human serum was investigated. The epoxy groups of p(GMA-MMA) microbeads was converted into amino groups with either ammonia or hexamethylenediamine (spacer arm). L-Histidine was then covalently immobilised on aminated and the spacer arm-attached p(GMA-MMA) microbeads using glutaricdialdehyde as a coupling agent. The specifity of the affinty matrix to IgG was increased by Cu(ll) metal-coordination complex with L-Histidine ligand on microbeads. The performance of modified microbeads on IgG purification from human serum was investigated. The affinity microbeads, the maximum adsorption capacity of IgG was found at pH 7.0.The adsorption capacity of p(GMA-MMA)-L-Histidine, p(GMA-MMA)- spacer arm-L-Histidine and p(GMA-MMA)-spacer arm-L-Histidine was found, 56.0, 93.9 and 142.2 mg/g respectively. The desorption of affinty microbeads was found %63 by glycine-HCI solution (pH 2.6). The IgG molecules could be repeatedly adsorbed and desorbed with affinity microbeads withhout noticeable loss in their IgG adsorption capacity. The purification of IgG with p(GMA-MMA)-spacer arm-L-Histidine from human serum was determined by High Pressure Liquid Chromatography (HPLC). The result of purification amount was found % 84.2 Keywords; Affinity matrix, L-Histidin ligand, Spacer arm, Cu(ll) metal ion, Immunoglobuline G IV