Modifiye edilmiş poli(MMA-GMA-EGDMA) mikroküreleri üzerine tirosinaz immobilizasyonu

Abstract

ÖZET MODİFİYE EDİLMİŞ POÜ(MMA-GMA-EGDMA) MİKROKÜRELERİ ÜZERİNE TİROSİNAZ İMMOBİLİZASYONU İŞLER, Ayten Kırıkkale Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Kimya Anabilim Dalı, Yüksek Lisans Tezi Danışman: Yrd. Doç. Dr. Adnan BULUT Ocak 2005, 78 Sayfa. Modifiye edilmiş poli(metilmetakrilat-glisidilmetakrilat- etilenglikoldimetakrilat) [poli(MMA-GMA-EGDMA)] mikroküreleri üzerine tirosinazın immobilizasyonu çalışıldı. Epoksi grubu içeren poli(MMA-GMA- EGDMA) mikroküreleri süspansiyon polimerizasyonu ile hazırlandı ve mikrokürelerin epoksi grupları hekzametilendiamin (uzatma kolu) ile amino gruplarına dönüştürüldü. Daha sonra bağlama ajanı olarak glutaraldehit kullanılarak poli(MMA-GMA-EGDMA) mikroküreleri üzerine tirosinaz kovalent olarak immobilize edildi. Serbest ve immobilize enzim için Michaelis-Menten kinetik sabitleri (Km ve Vmax) tayin edildi ve optimum pH ile optimum sıcaklık incelendi. Immobilize enzimin pH ve sıcaklık grafiklerinin serbest enzime göre daha geniş olduğu gözlendi, immobilize enzimin serbest enzime göre daha geniş pH ve sıcaklık aralığında aktivitesinin çoğunu koruduğu gözlendi.Serbest enzim 4 hafta içinde bütün aktivitesini kaybederken, immobilize tirosinaz iki aylık depolama süresince başlangıç aktivitesinin yaklaşık %36'sını korumuştur. Anahtar Kelimeler: Süspansiyon polimerizasyon, immobilizasyon, Tirosinaz. ii

ABSTRACT IMMOBILIZATION OF TYROSINASE ONTO MODIFIED POLY(MMA-GMA-EGDMA) MICROBEADS İŞLER, Ayten Kırıkkale University Graduate School of Natural and Applied Sciences Department of Chemistry, M.Sc. Thesis Supervisor: Assoc. Prof. Dr. Adnan BULUT January 2005, 78 Pages. Immobilisation of tyrosinase onto modified poly(MMA-GMA-EGDMA) microbeads was studied. The epoxy group containing poly(MMA-GMA- EGDMA) microbeads were prepared by suspension polymerisation and epoxy groups of the microbeads was modified into amino groups usjng hexamethylenediamine (as a spacer-arm). Tyrosinase was then covalently immobilised on spacer-arm-attached poly(MMA-GMA-EGDMA) microbeads using giutaric dialdehyde as a coupling agent. The Michaelis-Menten kinetics constants (Km and Vmax), optimum pH and optimum temperature for the free and immobilised enzymes were investigated. The temperature and pH profiles were broader for immobilised preparations than that of the free enzyme. Immobilised tyrosinase preparation retained much of their activity in wider ranges of temperature and pH than that of the free form. The free enzyme lost all its activity within 4 weeks. The immobilised tyrosinase mpreserved about % 38 of its initial activity during a two months storage period. Keywords: Suspension polymerisation, Immobilisation, Tyrosinase. IV