Hidrojen peroksit elektrodu tasarımında kullanılmak üzere katalazın manyetik kürelere immobilizasyonu

Abstract

Manyetik poli(glisidil metakrilat- metil metakrilat), poli(GMA-MMA) mikroküreleri ile katalazın kovalent immobilizasyonu çalışıldı. Bağlanma ajanı olarak glutar dialdehit kullanıldı. İmmobilize katalazın aktivitesinin yüksek olduğu tespit edildi. İmmobilize katalaz enziminin sıcaklığa karşı dayanıklığının serbest haline göre daha fazla olduğu gözlendi. Ayrıca, immobilize enzimin sıcaklık profilinin serbest enzime göre daha geniş olduğuda görüldü. Serbest ve immobilize enziminin kinetik parametreleri belirlendi. İmmobilize enzimin substratına ilgisinin azalmasıyla tespit edilen Michaels sabitleri (Km) serbest enzime göre daha büyük olduğu ve diğer taraftan, Vmax değerinin immobilize enzim için daha küçük olduğu gözlendi. 77 gün devam ettirilen kesikli işletimde manyetik poli(GMA-MMA) mikrokürelerine immobilize edilmiş enzimin aktivitesindeki kayıbın yalnızca %14 mertebesinde olduğu görüldü.

Covalent immobilisation of catalase onto magnetic poly(glycidyl methacrylate- methyl methacrylate), poly(GMA-MMA), microbeads was studied. Glutaric dialde was used as a coupling agent. Immobilization of catalase onto magnetic microbeads resulted an increase in the apparent activity with respect to the free enzyme. The activity yield of the immobilised catalase on the magnetic poly(GMA-MMA) microbeads was very high. Immobilised catalase preparation has resistance to temperature inactivation as compared to the free form. The temperature profile was broader for immobilised preparation than that of the free enzyme. Kinetic parameters were determined for immobilised catalase preparation as well as for the free enzyme. The values of the Michael?s constants Km for the immobilised catalase preparations were significantly larger, indicating decreased affinity by the enzyme for its substrate, whereas Vmax values were smaller for the immobilised catalase preparations. In a 77 days batch operation with magnetic microbeads, only 14% of immobilised catalase activity was lost.