Çeşitli elektrolit ve boya ile doldurulmuş cam mikroelektrodlarla merkezi sinir sisteminden potansiyel kaydedilmesi, potansiyel kaydedilen bölgenin işaretlenmesi amacıyla uygun boya ve akımın seçilmesi

Abstract

- 42 - VI. ÖZET Bu çalışmada, çeşitli elektrolit ve boya ile doldu rulmuş cam mikroelektrodlar la, merkez sinir sistemi nöron larında aksiyon potansiyelleri kaydedildi. Potansiyel kay dedilen bölgelerin belirlenebilmesi için; boyalardan hangi sinin uygun olduğu araştırıldı. Ayrıca, akım şiddeti ve uy gulama süresi değiştirilerek. işaret lenen alanlar karşılaştı rıldı. Bu amaçla, konsantrasyonları 0,5-2M olan CH_-COONa, KC1 ve NaCl elektrolitleri içinde; konsantrasyonu %D5 ile %2 arasında değişen vital boyalardan; Cresyl Echt Violet, Pontamine Sky Blue, Toluidine Blue, Methylene Blue ve Trypan Blue çözündürülmüş tür. Potansiyel kaydedilen bölge lerin elek trof oret ik olarak işaretlenmesinde, alanın; uy gulanan akım şiddeti ve süre ile doğru orantılı, mikroelekt- rodun direnci ile ters orantılı olduğu görüldü. Bu yöntemle, 0-5 dakika sürelerde 0-400 ym çapında, 5-10 dakika sürelerde 400-1700 ym çapında alanlar işaretlen di. Mikroelektrodun direncine bağlı olarak; 0,5-2M£2 arasın daki dirençler için 1100-750 ym çapında, 2-4Mfi dirençler arasında ise 750 ile 150 ym çapında alanlar işaretlenmiş tir. Elektroforez yöntemi ile işaretlemede 30-300 yA şidde tinde akım elektrodlardan geçilerek bölge boyanmıştır. İntrasellüler kayıt ve işaretleme yönteminde elekt rolit olarak; CH_-C00Na ve KC1, boya olarak; Pontamine Sky- 43 - Blue (PSB) ve Methylene Blue (MB) ile uygun sonuçlar alın mıştır. İşaretlenen nöron sayısı, mikroelektrodun uç çapı ve direnci ile uygulanan akımın şiddeti ve veriliş süresi ne bağlı olarak değişmektedir. İşaretlenen alanın en küçük değerde olması için; mikroelektrodun uç çapı küçük, dolayı sıyla direnci büyük, uygulanan akımın şiddeti küçük ve sü resi kısa olmalıdır.

- 44 - VII. SUMMARY In this work, action potentials were recorded from neurons of the central nervous system using glass micro- eletrodes filled with various electrolytes and dyes. Dyes most suitable to determine potential recorded areas were investigated. Marked areas were compared by varying the applied current and its duration time. For this purpose, vital dyes like Cresyl Echt Violet, Pontamine Sky Blue, Toluidine Blue, Methylene Blue and Trypan Blue were diluted with concentrations ranging from 5 %0 to 2 % inside CH*-C00Na, KC1 and NaCl electrolytes with concentrations 0.5-2M. When marking potential recorded areas electrophoretically, it was observed that the surface area was directly proportional to the applied current and to its duration, but was inversely proportional to the resistance of the microelectrode. With this method, areas with a diameter of 0-400 ym were marked in 0-5 minutes and those with a diameter of 400-1700 ym were marked in 5-10 minutes. As a function of the resistance of microelektrodes ; for areas with diameter ranging from 750 to 1100 ym the resistance used was found to vary from 2 to 0.5 Mfl and for those with diameter 150- 750 ym the resistance varied from 4 to 2 MQ. In the electrophoresis marking method, the areas were colored by passing a current of 30-300 yA through electrodes.- 45 - In the intracellular recording and marking method, good results were obtained with CH`-COONa and KC1 used as electrolytes and with Pontamine Sky Blue and Methylene Blue used as dyes. The number of marked neurons varies depending on the tip diameter and the resistance of the microelectrode and also on the applied current and its duration. In order to have a minimally marked area the tip diameter must be as small as possible thus having a larger resistance and the applied current intensity must be small and short in duration.