Normal ve hemoglobinopatik hasta kanlarından DNA izolasyonu ve karakterize edilmesi

Abstract

İnsan kan hücrelerinden DNA safi aştırıl di. DNA miktarı ve saflığı spektrofotometrik ölçümlerle ve agaroz gel elektro- forezi ile saptandı, DNA'mn uygun restriksiyon enzimlerinden oluşan parçaları molekül ağırlıklarına göre agaroz gel i üzerinde birbirlerinden ayrıştırıldı. Ayrışan bu DNA parçaları Southern transfer yöntemi ile nitroselüloza geçirildi. Değişik kaynaklardan sağlanan `prob` 1ar `nick- translasyon` 32 yöntemi kullanılarak P ile işaretlendi. İşaretli `prob`ile nitroselülozdaki DNA parçaları uygun koşullarda hibritleş- tirildi. Laboratuarımızda oturtulmasına çalışılan bu yöntemlerle ince lenen 47 talasemi hasta DNA'sının yalnızca 3 tanesinin 8-globin 1 oku sunda eksilme mutasyonu içerdiği görüldü.

-48- F. SUMMARY DNA was isolated from human blood cells. Amount and purity of the DNA were determined using spectrophotometry analysis and agarose gel electrophoresis. DNA fragments obtained after digestion with suitable restriction enzymes were separated on an agarose gel. These fragments were then transferred to nitrocellulose by the Southern transfer technique. Probes were obtained from various sources and labelled with 3? ~P using the `nick-translation` method. The labelled probe was hybridized to DNA fragments en the nitrocellulose under suitable conditions. After autoradiography, the results were evaluated. Using the procedures described above, blood samples of 47 3 -thalassemic patients were analyzed; deletion mutations in the 3-globin gene locus were observed in only 3 of them.