Heparin üzerinde çalışmalar

Abstract

ÖZET Heparin 2500-40000 arasında mol ağırlığına sahip bir mukopoliaakarittir. Tedavide bu farklı mol ağırlığına sahip heparin* ler kullanılmıştır. Heparin hazırlanmasında kullanılan drogun her seferinde değişmesi sonucu her seride farklı bile şim gösteren heparin' ler uygulanmaktaydı. Bugün bu farklı mol ağırlıklı heparinler yerine belli molekül ağırlığına sahip, yüksek molekül ağırlıklı (HMw) ve düşük molekül ağırlıklı (IMW) heparin içeren pre par atların tedavide kullanılmasına başlanmıştır. Bunun için uygulanan fraksiyonlandırma metotları firmaların özel olarak geliştirdiği yöntemler ile yapılmakta dır. Biz bu çalışmamızda, değişik menşeli heparinleri ham madde olarak ele aldık. Bunun için Heparin Sigma (grade I ve II) ve Heparin Roth kullanıldı. Bunların fraks iyon landırı İma sı için selüloz üzerinde preparatif ince tabaka kromatografisi yapıldı. Çalışma sonunda herbirinden üç ayrı fraksiyon elde edildi. Bu fraksiyonlar elüsyonu takiben liyofilize edildi. Ele geçen fraksiyonlar üzerinde fiziko kimyasal olarak metakro- mazi ve biyolojik tayin için de heparin tayininde yeni olarakuygulanan Heptest (anti-Xa) ve Hepaclot (AT-III) metodu uygu landı. Ayrıca bu fraksiyonların fibrinolitik sisteme ve anti- trombin (a-IIa) üzerine olan etkileri incelendi. Uygulanan testler sonucunda, metakromazi ile Heptest arasında bir korelasyon bulundu. Bu fraksiyonların yukarıda yazılı şekilde etkilerinin incelenmesi farklı her üç heparin- in 3. fraksiyonunun etki bakımından yüksek molekül ağırlıklı, 2. fraksiyonunun düşük molekül ağırlıklı heparin *e benzediği saptandı. Buna karşı her üç farklı heparin' in 1. fraksiyonu nun ise düşük aktiviteli olarak yüksek molekül ağırlıklı he parin'e benzediği tespit edildi. Bu arada, etki bakımından heparin ile bağıntısı olan defibrotid için de batokromatik miktar tayini için bir yöntem geliştirildi.

S U M MARY Heparin is a mucopolysaccharide with a molecular weight of 2500-40000. Such heparins of varying molecular weight have been used in therapy. As a result of changing raw material the heparin composition varies in each lot. Now, specific high molecular weight (HMW) and low mole cular weight (IMw) heparin preparations are used instead of conventional preparations. The applied fractionation methods used for this purpose are specially developed by manufacturers. In this study, heparins of different origins were emplo yed as raw material, such as Heparin Sigma (grade I and II) and Heparin Roth. Preparative thin-layer chromatography on cellulose M 300 was applied for fractionation. Three bands were obtained. After elution and lyophilisation three fractions were separated. They were assayed by metachromatic as a physico-chemical method and Heptest (anti-Xa) and Hepaclot (AT-III) as biological methods. Furthermore the investigation covered its effect on fibrinolytic and anti-thrombin systems. Correlation between the results obtained by metachromatic and conventionally biologic methods was re-examined by using Heptest which has recently been put forward for standardisation- 93 - of the assay. The tests on activity showed that the fractions 3 of all the heparin samples exhibited action of high molecu lar weight and that of the fractions 2 of low molecular weight. Moreover fractions 1 acted similarly as heparin of high mole cular weight but with lower activity. Additionally, a method has been developed for the assay of defibrotide which has bearing on the activity of heparin based on bathochromy.