Hibridoma tekniğiyle üretilen monoklonal antikorların spesifikliğinin ELISA yöntemiyle saptanması

Abstract

- 50 - 5. ÖZET Bu çalışmada, peri ferik insan kanından Histopaque- gradient yöntemiyle elde edilen lenfositlerle, Freund adjuvanıyla veya ısıyla öldürülmüş S. typhimurium ile bağışıklanan fare dalak hücreleriyle P /NSl/l-Ag4-l hücreleri PEG varlığında melezlendi. Oluşan hibrit hücreler HAT içeren seçici mediumda çoğaltıldılar. İnsan periferik kan lenfositleriyle bağışıklanan farenin dalak hücreleriyle yürütülen füzyon sonunda oluşan klonların özgünlüğünün belirlenmesinde uygulanan ELISA yönteminde özgün bir teknik geliştirildi. Isıyla öldürülmüş S. typhimurium ile bağışıklanan farenin dalak hücreleriyle yürütülen füzyon sonunda oluşan klonlardan özgün olan bir tanesi `limiting dilition` işlemiyle alt klonlamaya tabi tutuldu. Bu işlem sonunda oluşan klonların sentezlediği antikor tipi, ELISA testinde 2. antikor olarak IgM ve Igö kullanarak belirlendi.

- 51 - 6. SüMMAHY In this study mouse spleen cells immunized against human peripheric blood lymphocytes isolated by Histo- paque -gradient method, Freund adjuvant and heat inacti vated S. typhimurium are hybridized with P /NSl/l-Ag4-l cells in the presence of PEG. The hybrid cells are grown in selectiv medium containing HAT. A new modification of the KLISA method used in selection of the specific clones in the fusion with peripheric human lymphocytes is reported. A limiting dilition is made with a specific clon from the fusion with heat-inactivated S. typhimurium for subcloning. The specific antibodies secreted by this clon are determined with anti-mouse IgG and IgM in KLISA for their isotypes.