Sığırlarda embryo transfer tekniğinin ülkemiz koşullarında uygulanabilme olanağının araştırılması

Abstract

84 F. ÖZET Çalışmada, sığırlarda Embryo Transfer tekniğinin ülkemiz şartların da uygulanabilirliği ve çeşitli sonuçları incelenmiştir. Araştırmada 12'si verici ve 42'si alıcı olmak üzere toplam 54 hayvan kullanılmıştır. Çalışmalar biri özel diğeri devlete ait iki işletmede yürütülmüş tür. Vericilerin hazırlanması için, uterus yıkaması ve transfer tarihinden 26 gün evvel 2 mi. PGF2a (im) enjeksiyonu yapılmış, takip eden siklusun 12.günü akşamleyin 2.500 İ.E. dozunda PMSG (im) verilmiştir. PMSG aplikasyonunu izleyen 60. ve 72.saatlerde 2 kez PGF2a uygulanmıştır. îkinci PGF2a enjeksi yonunu takip eden 36. 48. ve 60. saatlerde vericiler dondurulmuş sperma ile tohumlanmışlardır. îkinci tohumlama ile birlikte, PMSG hormonunun ovariumlar üzerindeki etki süresini sınırlamak amacıyla 1.000 İ.E. Anti-PMSG (im) uygulanmıştır. Alıcılar, transfer gününden önceki 9. ve 20.günlerde 11 gün aralıklı 2 PGF2a enjeksiyonu ile sinkronize edilmişlerdir. Çalışmada uterus yıkaması için % 1 Fetal Calf Serum (FCS) katkılı Dulbecco mediumu kullanılmıştır. Kültür mediumunda FCS oram % 20'ye çıkarılmıştır.85 Embryolar östrustan sonraki 7.günde (D7) cerrahi olmayan yöntemle kazanılmıştır. Bulunan hücreler morfolojik değerlendirmeye tabi tutulmuş ve transfere uygun olarak değerlendirilenler alıcılara transfer edilmişlerdir. Tüm hayvanların kızgınlıkları değerlendirildiğinde 25 hayvanın l.grupta (% 46.30), 19 hayvanın 2.grupta (% 35.19), 7 hayvanın 3.grupta (% 12.96) ve 3 hayvanın da 4.grupta (% 5.56) olduğu tespit edilmiştir. Kullanılan 12 vericiden ll'i süperovulasyon tedavisine çok iyi reaksi yon göstermişlerdir. Reaksiyon gösterme oranı % 91.66'dır (11/12). Araştırmada, kazanılan toplam hücre, verici başına düşen hücre sayı sı, toplam fertil hücre, verici başına fertil hücre sayısı, bulunan yumurta hücre leri genel fertilite oranı, toplam dejenere hücre, verici başına dejenere hücre sayısı, bulunan dejenere hücrelerin tüm hücreler içindeki oranı, toplam infertil hücre, verici başına infertil hücre sayısı, bulunan infertil hücrelerin tüm hücreler içindeki oranı, toplam transfer edilebilir hücre, verici başına transfer edilebilir hücre sayısı, bulunan transfer edilebilir hücrelerin tüm hücreler için deki genel oranı sırasıyla aşağıdaki gibi bulunmuştur; 67, 5.58+4.09, 46, 3.83±2.73, % 68.66±5, 0.42±0.87, % 7.46,21, 1.75±4.11, % 31.34, 41, 3.42±2.66, % 61.19. Alıcıların transfer günü gerçekleştirilen cinsel organ muayenelerin de 18'i çok iyi (% 42.86), 15'i iyi (% 35.71), 7'si orta (% 16.66) ve 2'si de kötü (% 4.76) alıcı olarak değerlendirilmişlerdir. İneklerin 5'i çok iyi (% 25), 9'u iyi (% 45), 4'ü orta (% 20) ve 2'si kötü (% 10) iken; düvelerin 13'ü çok iyi (% 59.09), 6'sı iyi (% 27.27), 3'ü de orta (% 13.64) olarak değerlendirilmiştir. Gerçekleştirilen rectal palpasyon sonucu corpus luteumların 21 alıcı da solda (% 52.50) ve 19 alıcıda sağda (% 47.50) olduğu tespit edilmiştir. Embryoların alıcılara transferlerinden sonra, genel gebelik oranı % 63.89 (23/36) olmuştur. Bu oran inekler için % 53.33 (8/15), düveler için %86 71.43 (15/21) dir. Çalışmada bulunan gebelik oranları, alıcının kalitesinin transfer başarısını yükselttiğini göstermiştir. Gebe kalan 23 hayvandan sadece biri yavru atmış, diğerleri doğum yapmışlar, 12 erkek ve 10 dişi buzağı kazanılmıştır. Böylece 1 vericiden 5, 1 vericiden 4, 4 vericiden 3'er ve 1 vericiden de 1 adet yavru kazanılmıştır. Vericilerin daha sonraki reproduktif durumları da incelenmiş ve genelde olumsuz etkiler görülmemiştir.

87 G. SUMMARY In the present study, feasibility and various consequences of embryo transfer technique in cattle were examined under our country conditions. Total 54 animals -12 donors and 42 recipients- were carried out on the studies which were applied in private enterprise and public sector. By injecting 2 ml. PGF2a (im) donors were pre-synchronized 26 days before the flushing and transfer date. Superovulation was attempted by injecting 2500 IE. PMSG (im) on the 12th day at the night of the cycle, followed by two injections of PGF2a 60 and 72 hours later. Superovulated donors were inseminated artificially with frozen semen at 36tn, 48^ and 60tn hours following of second injection of PGF2a- At the time of second insemination donors received 1000 IE. Anti-PMSG (im) in order to restrict the influence period of PMSG on ovaries. Recipients were synchronized on 20tn and 9tn days before transfer date by injection of PGF2a. In the study, Dulbecco medium supplemented with 1% Fetal Calf Serum was used for flushing uterus and in culture medium FCS rate was increased to 20%. On day 7 postestrus, embryos were recovered non- surgically and evaluated morphologically by microscopy. Those which were graded as88 transferable were transferred to recipients. Heat signs of animals were qualified as follows; 25 animals in 1st group (46.30%), 19 in 2nd (35.19%), 7 in 3rd (12.96%), and 3 animals in 4th group (5.56%). Superovulated donors responded to the treatment (91.66%-11/12). In the study; recovered total ova/embryos, number ova/embryos per donor, total fertilized, fertilized per donor, fertilized (%), total degenerate, degenerate per donor, degenerate (%), total unfertilized ova, unfertilized ova per donor, unfertilized (%), total transferable, transferable per donor, transferable (%) were respectively: 67, 5.58+4.09, 46, 3.83±2.73, 68.66 %, 5, 0.42±0.87, 7.46%, 21, 1.75±4.11, 31.34%, 41, 3.42±2.66, 61.19%. During genital examinations of recipients on transfer day, 18 animals were evaluated as excellent (42.86%), 15 as good (35.71%), 7 as average (16.66%), and 2 of them as poor (4.76%). But these rates changed by cows as follows; 5 were evaluated as excellent (25%), 9 as good (45%), 4 as average (20%), 2 as poor (10%) and by heifers 13 were evaluated as excellent (59.09%), 6 as good (27.27%) and 3 of them as average (13.64%). As a result of rectal palpation, it was noticed that corpus luteums were on left by 21 recipients (52.50%) and on right by 19 recipients (47.50%). After the transfers of embryos to recipients, general pregnancy rate was 63.89% (23/36), whereas it was 53.33% (8/15) by cows and 71.43% (15/21) by heifers. Pregnancy rates found in the study, indicated that the quality of recipient promoted the transfer achievement. Among 23 conceived animals, only one aborted and the others dropped, 12 male and 10 female calves were obtained. Thus, from one89 recipient 5 calves, from other one 4, from four recipients 3 each and from one 1 calf were obtained. When the subsequent reproduciton of donors were examined non of negative influences were observed in general.