Friend hücrelerinden (Mürin eritrolösemik hücrelerden) G-bağlayan proteinlerin kısmi saflaştırılması ve bu proteinlerin karakterize edilmesi

Abstract

Yi- özet Yüksek af initeyle guanin nükleotitleri ile özgül o la re.}; etkiieşebilen G-hağlayan proteinler okaryet vs prckaryot organizmalarda hücre metabolizmasının düzenlenmesinde ihtiyaç duyulan bir protein grubu temsilcileridir. Araştırmamı sda, eritrolösemik hücrelerin farklı kesimlerinle G- bağlayan proteinlerin karakt er izasy onunu ve bu proteinlerin kesimlerdeki dağılımını tespit etmek amacıyla., değişik hücre alt yapılarını içeren çeşitli hücre kesimleri, diferansiyel santrifüj yönteminin kullanıldığı bir yaklaşımla hü c r e i e rd en sa f la ş 1 1 r ı İd ı. G-bağlayan proteinlerin guanin nükleotitl eriyle doğrudan etkileşimine dayanarak, saf laştırılan hücrcr kesimlerinin GİT' bağlama etkinliğine bakıldı. Bulgulara gore her hücre kesiminin GTP bağladığı ve en yüksek bağlamanın da P100 kesiminde olduğu görüldü. P100 kesiminde, diğer kesimlere göre % 47-78.2 erasında değişen bir GTP bağlanma fazlalığı hesaplandı. Bunun yanı sıra hücre kesimlerinde. G-bağlayan proteinlerinin GTE' bağlanmasıyla oluşturduğu GTPaz etkinliğini göstermek için yapılan GTPaz testinde, tüm kesimlerde GTPas etkinliği bulundu. Kesimler arasında en çok hid rol izi enen GTP'nin. GTP bağlanmasındaki gibi PiOû kesiminde olduğu ve bu kesimde diğer kesimlere göre % 7,5-88,7 arasında değişen bir hidrolizlerime fazlalığı gözlemlendi. Ayrıca GTPaz etkinliğinin kesimlerdeki dağılımının, GTE' bağlama etkinliğinin kesimlerdeki dağılımıyla uygunluk içinde olduğu görüldü.

4H Yi I- SÜHfiÂfiT G-bindinç proteins which are characterised with their high affinity and specific landing to the guanine nucleotides plays and essential role in the regulation of cell metabolism in eukeryotic and prokaryotic organisms. In this study various fractions have he en isolated froia murine erythroleukemia cells using a differential centrifigation method in order to show the distribution and characterisation of the G-binding proteins within the cell. GTE' binding activity has been investigated for each isolated cell fractions and it is shown that each of these cell fractions binds GTE* and the FiOO fraction has the highest binding capacity which is 47-78.2 % higher than the other fractions. On the other hand a GTPase test has been done on all fractions in order to show the GTt'ase activity is formed with the binding of G-bmding proteins to GTE' and GTPase activity is shown to be present m all fractions. Within all fractions the most hydroiy~ed GTE' has been found also within the FiOO fraction where a 7.. 5-88.7 % increase in hydrolysis has been noted. It is noted that the distribution of GTPase activity within the cells fractions is in accordance with the distribution of GTE' binding activity of the same fractions.