Pseudomonas aeruginosa ve acinetobacter baumannii izolatlarında metallobetalaktamaz ve indüklenebilir betalaktamaz varlığı, biofilm oluşumu ve çeşitli antibiyotik duyarlılıklarının araştırılması

Abstract

Çalışmamıza hastanemizde Ocak 2010 ve Haziran 2011 tarihleri arasında çeşitli materyallerden izole edilen 52 P. aeruginosa ve 48 A. baumannii olmak üzere toplam 100 bakteri alınmıştır.Bakterilerin tanımlanması standart klinik mikrobiyolojik yöntemler ile yapılmış, bu yöntemlere ek olarak daha iyi tanımlamanın yapılaması için API 20NE (Biomerieux) sistemleri kullanılmıştır. Bakterilerin invitro koşullarda antibiyotiklere direnç durumları Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) önerileri doğrultusunda disk difüzyon yöntemi ile belirlendi. Metallobetalaktamaz (MBL) üretiminde diğer fenotipik yöntemlere göre daha duyarlı olduğu düşünülen kombine disk yöntemi kullanıldı. İndüklenebilir betalaktamaz (İBL) araştırılırken Kirby-Bauer disk difüzyon yöntemi ile yapılan rutin antibiyotik duyarlılık testinde uygun disk dizilimi sağlanarak direkt indüksiyon testi yapıldı ve çalışmaya seftazidim ve sefotaksim duyarlı olan suşlar alındı. Pseudomonas aeruginosa ve Acinetobacter baumannii suşlarında biyofilm oluşumu kantitatif yöntemle incelendi.P. aeruginosa suşlarının % 32.7'si imipenem, % 100'ü amoksisilinklavulonik asit, % 34.6`sı amikasin, % 32.7'si seftazidim, % 51.9'u siprofloksasin, % 38.5' i sefepim, % 82.7'si sefotaksim, % 26.9'u gentamisin, % 98.1`i tigesiklin, % 100 `ü piparasilin-tazobaktama dirençliydi. A. baumannii suşlarının ise % 70.8'i imipenem, % 95.8'i amoksisilinklavulonik asit, % 77.1`i amikasin, % 85.4'ü seftazidim, % 91.7'si siprofloksasin, % 83.3'ü sefepim, % 91.7'si sefotaksim, % 47.9' u gentamisin, % 25`i tigesiklin, % 75`i piparasilin-tazobaktama dirençliydi.Metallobetalaktamaz üretimi açısından bakteriler incelendiğinde; 52 P. aeruginosa suşunun (n=14) %26.9' unda MBL pozitif idi. 48 A. baumannii suşunda ise (n=31) %64.6 MBL üretimi saptandı. Her iki bakteri arasında MBL üretimi açısından istatistiksel olarak anlamlı fark vardı (p<0.001, x2=14.30).Seftazidim duyarlı 37 suş indüklenebilir betalaktamaz üretimi açısından incelendi. Bunların 32'si (%86.48) P. aeruginosa ve 5'i (%13.52) ise A. baumannii idi. Seftazidim duyarlı 32 P. aeruginosa da %68.8 (n:20) oranında İBL üretimi pozitif saptanırken, % 31.2 (n:10) suşta İBL üretimi negatifti. Seftazidim duyarlı 5 A. baumannii suşunda %60 (n:3) oranında İBL üretimi saptanırken, %40 (n:2) oranında ise İBL negatif olarak bulundu. Seftazidim duyarlı P. aeruginosa ve A. baumannii arasında İBL üretimi açısından istatistiksel olarak fark saptanmadı (p=0.530). P. aeruginosa ve A. baumannii suşları biofilm oluşturma açısından incelendiğinde P. aeruginosa'da biyofilm oluşumu %51.9 iken, A. baumannii suşlarında ise %56.3 olarak bulunmuştur. P. aeruginosa suşlarında MBL üretimi ile biyofilm oluşumu arasında MBL pozitif suşların daha fazla biyofilm oluşturdukları bulunmuştur.Dünyadaki direnç oranlarına baktığımızda Pseudomonas ve Acinetobacter türü bakterilerde giderek artan miktarlarda antibiyotik direnci görülmektedir. MBL üreten bakterilerin aztreonam dışında tüm betalaktamlara dirençli olmaları ve klinik uygulamada uygun bir MBL inhibitörünün bulunmaması, ayrıca MBL ile aminoglikozid direnç genlerinin genetik olarak bir arada bulunması epidemiyolojik açıdan MBL varlığının tespit edilmesi çok önemlidir. Bazı Gram-negatif bakterilerde indüklenebilir betalaktamazların artması klinik problemlere neden olmaktadır. Yeni betalaktam antibiyotiklerle tedavi sırasında çoklu betalaktam direnci hızla oluşmaktadır. Böyle çoklu direnç gösteren mikroorganizmalar hastane içinde yayılmakta ve önemli bir nazokomiyal patojen olmaktadırlar. Son zamanlarda merak uyandıran bir başka konuda bakterilerin biyofilm oluşturmasının klinikdeki önemidir. Biyofilm formunun planktonik forma göre yaklaşık 10 kat daha dirençli hale geldiği bazı çalışmalarda gösterilmiştir buda bize önümüzdeki günlerde biyofilm oluşturmanın daha önemli olacağını göstermektedir.Anahtar sözcükler: MBL üretimi, İBL üretimi, Biyofilm oluşumu, P. aeruginosa ve A. baumannii

The study of various materials at our hospital between January 2010 and June 2011 isolated from 52 P. aeruginosa and 48 A. baumannii were included a total of 100 bacteria.Identification of bacteria made by standard clinical microbiological methods, in addition to these methods being done to better define the API 20NE for (Biomerieux) systems are used. Bacterial resistance to antibiotics in vitro conditions, Clinical and Laboratory Standards Institute states (CLSI) was determined by disk diffusion method according to proposals. Metallobetalactamase (MBL) production, are thought to be more sensitive than other phenotypic methods combined disk method was used. Inducible beta-lactamase (IBL), investigating the Kirby-Bauer disk diffusion method for routine antibiotic susceptibility testing with the appropriate providing direct induction test was performed on the disk array and the strains in the study were sensitive to ceftazidime and cefotaxime. Biofilm formation of Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter baumannii strains studied in quantitative.P. aeruginosa was resistant of 32.7% to imipenem, 100% to amoksisilinklavulonik acid, 34.6% to amikacin, 32.7% to ceftazidime, 51.9% to ciprofloxacin, 38.5% to cefepime, 82.7% to cefotaxime, 26.9% to gentamicin, 98.1% to tigecycline and 100% to piparasilin-tazobactam. A.baumannii was resistant of 70.8% to imipenem, 95.8% to amoksisilinklavulonik acid, 77.1% to amikacin, 85.4% to ceftazidime, 91.7% to ciprofloxacin, 83.3% to cefepime, 91.7% to cefotaxime, 247.9% to gentamicin, 25% to tigecycline and 75% to piparasilin-tazobactam.A bacterium for the production of MBL is examined strains of P. aeruginosa 26.9% and strains of A. baumannii were present. A. baumannii strain (n = 31) was 64.6% MBL production. MBL production between the two bacteria were no statistically significant difference (p <0.001, x2 = 14:30).Inducible beta lactamase productions were investigated for 37 strains susceptible to ceftazidime. Of these, 32 (86.48%) P. auroginosa and 5 (13:52%) was the A. baummanni. IBL production of P. aeruginosa and A. baumannii susceptible to ceftazidime, no statistically significant differences were detected (p = 0530).Biofilm formation was detected 51.9% in P. aeruginosa and 56.3% in A. baumannii.When we look at the world, rates of resistance in bacteria, Pseudomonas and Acinetobacter species are increasing amounts of antibiotic resistance. MBL-producing bacteria are resistant to beta-lactams except aztreonam in clinical practice and the lack of a suitable inhibitor of MBL, as well as presence of MBL together with the aminoglycoside resistance genes as a genetic epidemiological perspective is very important to detect the presence of MBL. Some Gram-negative bacteria cause clinical problems increased inducible beta-lactamases. New betalactam antibiotics during the treatment consists of multiple beta-lactam resistance quickly. Such multi-resistant microorganisms is an important nosocomial pathogen in the hospital. Recently, another intriguing issue is the importance of clinic building of biofilm bacteria. Approximately 10-fold more resistant than planktonic form biofilm becomes the form shown in some studies show that pruning would be more important to us to create a biofilm in the coming days.Key Words: MBL production, IBL production, Biofilm formation, P. aeruginosa and A. baumannii