Bacillus subtilisin ksiloz izomeroz geninin klonlanmasına ilişkin çalışmalar

Abstract

öz Bacillus subtllis ATCC 6633 genomu Sau3AI ile kısmi olarak kesildi. Elde edilen fragmentler iki ayn plazmid vektöre bağlanarak Escherichia colfye transformasyonunda kullanıldı. pSABI plazmid vektörü ile gerçekleştirilen transformasyon denemeleri sonucunda ksiloz (+) fenotipte klon elde edilemedi. Başarılı sonuçların alındığı pMK3 plazmid vektörünün kullanıldığı transformasyon çalışmalarında ise 82 adet ksiloz (+) fenotip gösteren klon saptandı. Bu klonların Bacillus subtilis'e ait insert taşıdıktan, restriksiyon enzimleri ile kesilmiş plazmidlerin agaroz jel elektroforezi analiziyle de doğrulandı. ABSTRACT The Studies on the Cloning of Xylose Isomerase Gene of Bacillus subtilis The genomic DNA of Bacillus subtilis ATCC 6633 was partially digested with Sau3AI. Fragments were ligated to two different vectors and used for transformation of Escherichia coll. When pSABI plasmid vector was used, any xylose (+) clone was obtained. However, the succesful results were obtained when pMK3 plasmid vector was used, and 82 xylose (+) clones were selected. It was also confirmed that these clones have inserts of Bacillus subtilis genomic DNA by gel electrophoretic analyses of plasmids digested restriction endonucleases.

öz Bacillus subtllis ATCC 6633 genomu Sau3AI ile kısmi olarak kesildi. Elde edilen fragmentler iki ayn plazmid vektöre bağlanarak Escherichia colfye transformasyonunda kullanıldı. pSABI plazmid vektörü ile gerçekleştirilen transformasyon denemeleri sonucunda ksiloz (+) fenotipte klon elde edilemedi. Başarılı sonuçların alındığı pMK3 plazmid vektörünün kullanıldığı transformasyon çalışmalarında ise 82 adet ksiloz (+) fenotip gösteren klon saptandı. Bu klonların Bacillus subtilis'e ait insert taşıdıktan, restriksiyon enzimleri ile kesilmiş plazmidlerin agaroz jel elektroforezi analiziyle de doğrulandı. ABSTRACT The Studies on the Cloning of Xylose Isomerase Gene of Bacillus subtilis The genomic DNA of Bacillus subtilis ATCC 6633 was partially digested with Sau3AI. Fragments were ligated to two different vectors and used for transformation of Escherichia coll. When pSABI plasmid vector was used, any xylose (+) clone was obtained. However, the succesful results were obtained when pMK3 plasmid vector was used, and 82 xylose (+) clones were selected. It was also confirmed that these clones have inserts of Bacillus subtilis genomic DNA by gel electrophoretic analyses of plasmids digested restriction endonucleases.