E Vitamininin (Tekoferollerin) Cu (II) neokuproin reaktifiyle spektrofometrik tayini

Abstract

V. ÖZET E VİTAMİNİNİN (TOKOFEROLLERİN) BAKIR (II) -NEOKUPROİN REAKTİFİYLE SPEKTROFOTOMETRİK TAYİNİ Yağda çözünen vitaminlerden olan E vitamini son zamanların popüler vitaminlerindendir. îlaç olarak varlığının yanısıra çok sayıda besin ve kozmetik ürününde katkı olarak bulunmaktadır. Doğada E vitamini etkisini gösteren bileşikler içinde E vitamini denildiğinde a-tokoferol anlaşılır. Genellikle a- tokoferol yerine aynı E vitamini etkisine sahip ve daha dayanıklı olan a-tokoferil asetat kullanılır. E vitamininin kantitatif tayini için spektrofotometrik yöntemler arasında demir (III) -batofenantrolin yöntemi yaygın olarak kullanılmaktadır (10). Bu çalışmada daha önce çeşitli indirgenlerin kantitatif analizinde kullanılabileceği saptanmış olan bakır (II) -neokuproin yöntemi (19) E vitamini tayini için ilk kez uygulandı. Genellikle a-tokoferil asetat kullanıldığından öncelikle a-tokoferil asetatın a-tokoferole hidroliz şartları incelendi (10). Hidroliz verimi %93,88 olarak saptandı. Bakır (II)- neokuproin yöntemi 1 ml 1, 0xl0~2CuCl2.2H20+2/ 5mL 3,0x10`% neokuproin çözeltisi (alkolde) +lmL 1,0 M amonyum asetat tamponu + (3-x) mL alkol + x mL hidrolizat sırasıyla elde edilen karışım çözeltisinin absorbansmın 30 dakika bekleme süresinin (bakır (II) -tokoferol redoks reaksiyonun ve bakır (I) -neokuproin kompleksi oluşumunun tamamlanması için) sonunda 450 nm'de okunması şeklinde uygulandı. Saf a-tokoferol ile yapılan denemelerde molar absorbsiyon katsayısı (3,1+0, 15).104 dm3mol-lcm-l olarak saptandı. Yöntemin rölatif standart sapması %4,69 bulundu. F testi uygulanarak yöntem demir (III) -batofenantrolin yöntemi ile karşılaştırıldı. Bulunan F değeri (1,42), F095 = 5,05 (5 serbestlik derecesi için) değerinden küçük olduğundan yöntemdeki hataların gelişigüzel hatalardan kaynaklandığı 31sonucuna varıldı. Yöntem biri tablet diğeri ampul formunda olan iki ticari örneğe uygulandı. 32

SUMMARY SPECTROPHOTOMETRY DETERMINATION OF VITAMIN E (TOCOPHEROLS) BY THE COPPER (II) -NEOCUPROİNE REAGENT Vitamin E, being a fat soluble vitamin, has recently been popular as a focus of active research. Aside from its pharmaceutical usage, it is an ingredient of many food and cosmetic products. Among a number of compounds which act as vitamin E, a-tocopherol is the one which is known as vitamin E. Usually, instead of a-tocopherol, a-tocopheryl acetate is used as the more stable compound showing vitamin E activity. Among the spectrophotometric methods for the quantitative estimation of vitamin E, iron (III) -bathophenanthroline method is widely used (10). In this study, the copper (II) -neocuproine method which has previously been demonstrated to determine a number of reducing agents (19) has been applied to vitamin E analysis for the first time. Since a-tocopheryl acetate is generally used, the hydrolysis (10) conditions of this compound to a-tocopherol has been investigated initially. The hydrolysis efficiency was found as 93.88%. The recommended procedure for a-tocopherol determination by the Cu(II)- neocuproine reagent is as follows: Add 2.5 mL of 3.0xl0-3 M neocuproine (Nc) in ethanol to 1 mL l.OxlO-2 M CuCl2«2H20; then add 1 mL of 1.0 M ammonium acetate buffer, (3-x) mL ethanol and x mL hydrolyzate in diethyl ether, shake thoroughly and let stand for 30 minutes (so that tocopherol would be completely oxidized by Cu(II)-Nc to produce the Cu(I)-Nc complex), and measure the absorbance at 450 nm against a reagent blank. The molar absorptivity obtained with pure a-tocopherol was computed as (3, 1±0, 15).104dm3mol~1cm~1. The relative standard deviation of the method was 4.69%. The developed method was statistically compared by means of F test to the iron (III)- bathophenanthroline method. Since the calculated F value was 1.42 which was less than F0.95 = 5.05 (for 5 degrees of freedom), it was concluded that the errors encountered in the application of the method were random errors rather than 33systematical ones. The method was applied to two commercial samples, one in tablet and the other in ampoule from. 34