Oksidatif stres uygulanmış Schizosaccharomyces pombede protein oksidasyonuna karşı doğal antioksidanların koruyucu etkisi

Abstract

Bu çalısmada E vitamini türevi Trolox'un Schizosaccharomyces pombe maya türündenormal hücre metabolizması sırasında ve hücrelerin 30 dakika 1 mM hidrojen peroksitleisleme sokulması sonucunda indüklenen oksidatif hasarlara karsı koruyucu etkisiarastırıldı.Hücre içi oksidasyon düzeyi, fluoresans indikatörü 2,7-diklorofluoresein ilespektrofluorometrik olarak belirlendi. Protein karbonilleri 2,4-dinitrofenilhidrazin iletürevlendirildi ve spektrofotometrik olarak ölçüldü; ayrıca tek boyutlu elektroforezitakiben gerçeklestirilen Western emdirimi ile immünolojik olarak saptandı. Katalazaktivitesi H2O2 yıkımının ölçülmesiyle ortaya konuldu. 20S proteazom aktivitesifluorogenik peptid Suc-LLVY-AMC kullanılarak belirlendi. Hücre içi protein yıkımıspektrofluorometrik yöntemle izlendi.Maya hücrelerinin 1 mM Trolox ile ön isleme sokulması bagıl hücre canlılıgını artırdı,hücre içi oksidasyon düzeyini düsürdü, katalaz aktivitesini indükledi ve proteinkarbonillerini baskıladı. Proteazom aktivitesi Trolox ile islem görmüs hücrelerde, islemgörmemis kontrole göre daha düsüktü. Bu durum protein karbonil düzeyindeki düsüsünproteazom aktivitesine baglı olmadıgını ortaya koydu.Trolox aracılı korumanın H2O2 tasınmasındaki degisim, in vitro süpürücü aktivite veyaantioksidan savunma sistemlerinin indüksiyonundan çok artan hücre içi süpürücüetkiden kaynaklandıgı bulundu.Bu çalısma Trolox uygulamasının maya hücrelerini hidrojen peroksitle indüklenenoksidatif hasarlardan, özellikle de protein oksidasyonundan korudugunu ortaya

The protective effect of vitamin E derivative, Trolox against oxidative damages inducedduring the normal cell metabolism as well as by treating the cells with 1mM hydrogenperoxide for 30 minutes in the fission yeast Schizosaccharomyces pombe was examined inthis study.Intracellular oxidation level was spectrofluorometrically determined by the fluorescenceindicator 2,7-dichlorofluorescein. Protein carbonyls were derived with 2,4-dinitrophenylhydrazine and measured by spectrophotometric method as well as they weredetected by one-dimensional electrophoresis followed by Western blot immunoassay.Catalase activity was evaluated by measuring the H2O2 decomposition. The 20Sproteasome activity was determined using the fluorogenic peptide suc-LLVY-AMC.Intracellular protein degradation was monitored by the spectrofluorometric technique.Pretreatment of the yeast cells with 1mM Trolox enhanced the relative cell viability,decreased intracellular oxidation level, induced catalase activity and suppressed the proteincarbonyls. Proteasome activity was lower in Trolox-pretreated groups than untreatedcontrol. This indicated that decrease in protein carbonyl level was not due to activation ofthe proteasome.Trolox-mediated protection was found to be due to increased intracellular scavenging effectrather than alteration in H2O2 transport, in vitro scavenging activity or induction ofantioxidant defense system.This study suggests that Trolox treatment protects yeast cells from oxidative damages,especially from protein oxidation induced by hydrogen peroxide.