Ganoderma lucidum mantarlarından konvansiyonel ve süperkritik ekstraksiyon yöntemleri ile elde edilen ekstrelerin bileşenlerinin tanımlanması

Abstract

Bu çalışmada, ?Balcalı? ve ?Alata? olarak adlandırılan yöresel iki farklı Ganoderma lucidum türünün biyoaktif bileşenlerinin birbirini takip eden ardışık ekstraksiyonlar ile elde edilmesi ve bu bileşenlerin yapısal belirlemesi üzerinde çalışılmıştır. Ön temizleme adımı da diyebileceğimiz ilk aşamada yağ asitleri gibi apolar bileşenler 50ºC sıcaklık ve 3300 psi basınçta süperkritik CO2 ile ekstrakte edilmiştir. Elde edilen yağımsı ekstraktın yağ asidi kompozisyonu bileşenlerin esterleştirilmesi sonrasında, yağ asidi metil esterleri standartları aracılığı ile GC'de belirlenmiştir. İkinci aşamada türlerdeki triterpenoidlerin ekstraksiyonları geri soğutucu altında etanol ile gerçekleştirilmiştir. Bu grubun bileşenlerinin fraksiyonlanması semi-preperatif HPLC sistemi ile gerçekleştirilmiştir. Bu fraksiyonların kimyasal yapı belirleme çalışmaları HPLC/MS-MS (tandem ms) ve 1H NMR ölçümleri ile belirlenmiştir.Son adımda ise suda çözünebilir polisakkaritler ve polisakkarit-protein kompleksleri (glikoproteinler) sıcak su ekstraksiyonu ile ekstrakte edilmiştir. İzole edilen polisakkaritlerin moleküler kütle dağılımları hem (HPSEC-MALLS) hem de GFC yöntemi ile belirlenmiştir. Polisakkarit moleküllerinin oluşturduğu agregat'ların varlığı yine HPSEC-MALLS analizleri ile tespit edilmiştir. Çözeltinin ısıtılmasının ve sonikasyonun bu agregat'lar üzerine etkisi ayrıca incelenmiştir. Saflaştırılan polisakkaritlerin protein, üronik asit ve monosakkarit içerikleri örneğe uygulanan çeşitli kimyasal analizler ile belirlenmiştir.

In these study, Identification of bioactive component from the fruiting body of two different local Ganoderma lucidum strains (Balcali and Alata) were obtain with a sequential extraction procedure. As a preliminary clean up step, apolar components like fatty acids were extracted via supercritical CO2 atmosphere at 50ºC and 3300 psi pressure. Fatty acid composition of extracts were identified from fatty acid methyl ester standarts with GC. At the next stage extraction of triterpenoids from these local G. lucidum strains were carried out with ethanol under reflux. The components of these groups were fractionated with a semi-preperative HPLC system. Chemical structure identification of these fractions were carried out with HPLC/MS-MS (tandem ms) and 1H NMR measurements.In the last step, water-soluble polysaccharides and polysaccharide?protein complexes were extracted from fruiting bodies with hot water. Molecular weight characterizations of these strains were determined with both (HPSEC-MALLS) and GFC system. Aggregation of polysaccharide molecules in extract was also revealed by HPSEC-MALLS analysis. The effects of heating and sonication on the solubility of aggregates were also investigated. Protein%, Uronic acid% and monosaccharide content analysis were also applied on these extract.